eb病毒barf1基因表达对胃癌细胞株sgc7910生物学行为的影响

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1、EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞株SGC7910生物学行为的影响：李友琼，张雪怡，曾健陈巧林李良菊，成静，訾瑞峰，周天戟【摘要】目的：了解EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：构建pSG5/BARF1真核表达载体，转染到EB病毒阴性的胃癌细胞系SGC7901，经RTPCR鉴定，获得BARF1稳定表达的细胞克隆。以pSG5空载体转染细胞为对照，进行细胞凋亡诱导实验、细胞增殖实验、软琼脂集落形成实验和细胞迁移实验。结果：与对照组相比，BARF1表达细胞组经抗癌药顺铂诱导后的细胞凋亡

2、率显著降低（P<0.01），增殖速度显著加快（P<0.01），软琼脂集落形成率显著提高（P<0.05），细胞迁移能力显著增强（P<0.05）。结论：BARF1基因能够全面增强胃癌细胞的肿瘤原性，可能在EB病毒相关胃癌发生与演化的整个过程中起重要作用。【关键词】EB病毒；BARF1；胃癌细胞；细胞生物学行为［Abstract］Objective:ToinvestigatetheoncogenicfunctionsofEBVencodedBARF1geneingastricepith

3、elialcells.Methods：ApSG5/BARF1expressionvectoroderatelydifferentiatedgastriccancercelllineSGC7901.ThestablytransfectedcellclonesitingdilutionandG418screening,andBARF1expressionedbyRTPCR.Thebiologicalbehavioranalysisminedichloroplatinum(DDP),cellgroation

4、assay,asigrationtestunderthecontrolofvacantpSG5vectortransfectedclones.Results：BARF1expressioningastriccancercellsledtomoreresistanttoapoptosisinducedbyDDP,fasterproliferation,highercolonyformationrateinsoftagar,andstrongermigrationcapability.Conclusion：B

5、ARF1genehadallaroundoncogenicabilityingastricepithelialcellsandmayplayanimportantroleintheotingEBVassociatedgastriccarcinoma.［Keyega公司，质粒和真核细胞DNA提取和琼脂糖凝胶DNA片段回收试剂盒购于Axygen公司。限制性DNA内切酶、T4DNA连接酶、TaqDNA聚合酶及DNA去磷酸化试剂盒购于TaKaRa生物工程公司。细胞转染试剂Lipofectamine2000购于I

6、nvitrogen公司，RPMI1640和DMEM培养基、G418和真核细胞RNA提取试剂Trizol购于Gibco公司。新生牛血清（NCS）购于民海生物工程公司。RTPCR试剂盒购于Toyobo公司。细胞培养板、细胞迁移实验用Transl青霉素和100g/ml链霉素，培养于37℃，5％CO2环境中，2～3d换液1次。1.2.2pSG5/BARF1真核表达载体的构建提取B958细胞DNA作为模板，用PCR扩增BARF1的ORF［4］。产物长度为697bp，经琼脂糖凝胶电泳回收，然后连接到pGEMTE

7、asy载体，转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α并进行蓝白筛选，挑选白色菌落扩增后提取质粒，EcoRⅠ酶切后，电泳回收715bp片段。pSG5载体同样酶切并去磷酸化后，与该片段连接，转化E.coliDH5，挑取菌落扩增提取质粒，酶切鉴定插入方向，并进行DNA序列测定。1.2.3细胞转染与克隆pSG5/BARF1及pSG5对照质粒用Lipofectamine2000转染细胞，操作按说明书进行。用有限稀释法进行克隆，转染后第3天将细胞消化分散，按每孔100个细胞接种96孔细胞培养板。整个过程用含300g/m

8、lG418的培养液进行筛选培养，每周换液一次，直至长出抗性克隆，然后扩大培养。1.2.4BARF1表达鉴定采用RTPCR进行。用Trizol法提取细胞总RNA并进行逆转录，操作按说明书进行。然后用PCR扩增BARF1ORF内部一段序列［5］，产物用1.5％琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像仪中摄影。选取3个表达量相对较高的克隆进行细胞生物学行为的观察，并随机抽取3个pSG5转染细胞克隆作为对照。1.3细胞生物学行为的观察1.3.1