核酸恒温扩增技术研究进展.pdf

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1、万方数据釜盏I带术&o毋⋯．22BIOTECHNOYVol～No．2M趴，⋯ZUI1LE7兀'ERSINLOG··z肌ar．，doi：10．3969／j．issn．1009—0002．2011．02．035核酸恒温扩增技术研究进展汪琳，罗英，周琦，赖平安，柏亚铎北京出入境检验检疫局检验检疲技术中心，北京100026综述[摘要】核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述，包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切12酶核酸恒温扩增、依

2、赖解旋酶的恒温扩增、转录依赖的扩增、杂交捕获法、转录介导的扩增等的原理、优缺点及应用。【关键词】核酸恒温扩增；环介导恒温扩增；链替代扩增；依赖核酸序列的扩增；滚环扩增[中图分类号】Q78[文献标识码】A【文章编号】1009-0002(2011)02-0296-07AdvancesintheResearchofNucleicAcidIsothermalAmplificationTechnologiesWANGLin,LUOYing,ZHOUQi,LAIPi，培“％BAIYa-DuoBeijingEntry—ExitIns

3、pectionandQuarantineBureau，Beijing100026，China【Abstract】Nucleicacidisothermalamplificationtechnologyhasbeenwidelyappliedinlifesciencel僦ai'ehandrelatedal'ea$．Inthepaper，webrieflysummarizedtheprogressofnucleicacidisothermalamplificationtechnology，whichincludesthet

4、heories，advantagesanddisadvantagesandapplicationofloop-mediatedisothermalamplification，stranddisplacementamplification，nucleicacidsequence-basedamplification，roilingcircleamplification，nickingen，．[．zymemedia】tedamplificationhelicase-dependentisotherma—lDNAamplif

5、icationhybridcaptureetalKeywordsnucleicacidisothermalamplification；loopmediatedisothermalamplification；stranddisplacementamplification；nucleicacidsequence-basedamplification；rollingcircleamplification核酸扩增技术是分子生物学领域常用的技术，聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)是使用最为广泛

6、的核酸扩增技术，可以扩增和分离目的基因，以其灵敏性、特异性和快速性得到广泛应用。然而，PCR技术需要反复的热变性，无法摆脱依赖精良仪器设备的局限，从而限制了其在临床现场检测中的应用。自20世纪90年代初，很多实验室尝试发展无须热变性的核酸恒温扩增技术，现已开发出了如依赖核酸序列的扩增、链置换扩增、核酸序列扩增、转录酶扩增、滚环扩增、环介导恒温扩增、解链酶扩增等多种恒温扩增技术。1环介导恒温扩增环介导恒温扩增(100p—mediatedisothermalamplification，LAMP)是Notomi等川于2000

7、年首先提出来的一种新的核酸扩增技术，它针对目的基因的6个区域设计4条特异性引物(包括2条内引物和2条外引物)，利用一种具有链置换特性的BstDNA聚合酶，在等温条件下高效、快速、高特异地扩增靶序列，其反应过程包括哑铃状模板合成阶段、循环扩增阶段、伸长和再循环阶段。其基本原理是靶DNA变性后，内外引物在BstDNA聚合酶作用下延伸，外引物的延伸产物将内引物的延伸产物置换出来，形成一个哑铃状的DNA，然后进入循环扩增阶段，不断延伸和扩增，最终形成茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段混合物。LAMP的优点：(重)LAMP有

8、较高的特异性和抗干扰能力，只有当2对引物与目的片段的6个区域都匹配上时才能进行扩增；②LAMP的反应体系稳定可靠，在室温下放置2周后仍然稳定，并且对于样品中原有或污染的无关、干扰片段仍然不敏感，而其他类似技术则无法做到这一点；(霪)LAMP的敏感性较高，扩增快速、高效；④LAMP结果的鉴别很【收稿日期】20lo_D8—23[基金项