Genistein对Aβ所致痴呆大鼠工作记忆的影响及机制探讨.doc

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1、Genistein对Ap所致痴呆大鼠工作记忆的影响及机制探讨Genistei仃对Ap所致痴呆大鼠工作记忆的影响及机制探讨原丽1郭小姝1解瑞2刘晓杰1李清山1刘燕1张翠英1L山西长治医学院生理教研室，山西长治046000;2•长治医学院附属和平医院眼科，山西长治046000[摘要]目的比较不同浓度染料木黄酮Genistein对痴呆模型大鼠认知功能的影响，并探讨可能的分子机制。方法50只SD大鼠随机分为对照组、DMSO组、A[31-4O模型组、2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein治疗组。对照组,DMSO组侧脑室注射0.9%生理盐水，其余3组侧脑室注射AP

2、1-42制备阿尔茨海默病(AD)痴呆模型大鼠，1周后，不同剂量Genistein治疗组分别用2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein灌胃，DMSO组则用0.5%DMSO溶剂灌胃,对照组与AP1-40组分别用0.5%生理盐水灌胃，1次/d,连续四周后,通过Y迷宫试验测定各组大鼠工作记忆,利用RT-PCR分析大鼠海马组织中STAT3和Caspase-3mRNA相对表达量。结果单独给予Api-40的大鼠在Y迷宫试验中自发交替反应率明显降低，海马STAT3的mRNA相对表达量明显降低，但Caspase-3mRNA相对表达量显著上升；低剂量Genistein组逆转

3、Api-40形成的损伤，给予高剂量Genistein(20mg/kg)后,检测结果与A[31-40组差异无统计学意义。结论低剂量Genistein通过上调STAT3mRNA同时抑制Caspase-3基因表达拮抗了Api-40诱导的神经毒作用，而高剂量Genistein表现出相反的效应与机制。以上提示，给予低剂量Genistein可能有助于预防或延缓AD患者认知功能的衰退。关键词染料木黄酮；工作记忆；B淀粉样蛋白；Y迷宫；实时定量PCR［中图分类号］R749.161［文献标识码］A［文章编号］1674-0742(2014)10(b)・0058-03［基金项目］山西省高等

4、学校科技硏究开发项目(20091133X［作者简介］原丽(1978.3-),女，山西长治人，硕士，助教，硏究方向：神经生理学。［通讯作者］张翠英(1963.6-),女，山西长治人，硕士研究生，教授，硏究方向：神经生理。来源于大豆的异黄酮类物质染料木黄酮(Genistein)又称金雀异黄素，其结构特与相对分子量均与雌二醇(E2)的结构相似，与雌激素受体B具有较高的亲和力，被称为植物雌激素［1］。因而被认为低剂量的Genistein可能是雌激素替代治疗或预防神经退行性疾病的有效措施。体外研究也发现，低剂量Genistein可通过激活Akt诱导Nrf2活性,从而降低淀粉样肽

5、诱导的神经元降解，改善AP1-40所致的痴呆模型大鼠的空间学习记忆的损伤［2］。高剂量的Genistein可以产生神经元细胞毒作用，并导致细胞凋亡⑶；但不同浓度Genistein对痴呆模型大鼠工作记忆的具体影响如何及其可能的机制还未见报道。P淀粉样肽(P-amyloidpeptides,A［3)在脑内沉积是阿尔茨海默病(Alzheimer'sdiseasezAD)发生发展的重要病理基础,最终患者岀现进行性的学习记忆和认知功能障碍［4］。故该实验通过侧脑室注射AP1-40制备AD模型大鼠，观察不同剂量的Genistein对AD模型大鼠空间学习记忆和工作记忆的影响，并探讨

6、其可能的机制。现报道如下。1材料与方法1.1动物及给药3月龄的健康雄性SpragueDawley(SD)大鼠(230±30)g50只，由山西医科大学动物中心提供。Genistein和A^l-40试剂均购于美国Sigma公司产品，A[31-40溶于0.9%的生理盐水，Genistein溶于0.5%二甲基亚飒(DMSO),SD大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)后，固定暴露颅骨，参照脑立体定位图谱，侧脑室给药；Genistein灌胃1次/d,坚持4周。1.2实验分组随机将SD大鼠分为5组09%生理盐水组、0.5%DMSO溶剂组、25nmolA[31-40组

7、、2.0mg/kgGenistein+Api-40组、20mg/kgGenistein+Api-40o1.3Y迷宫测试Y迷宫由3个等长互为120。角的臂组成，随机定为A、B、C区。实验时将大鼠放入1个臂的末端，让其自由出入3个臂，记录持续8min,并记录大鼠进入各区的次序和总次数(N),以连续进入3个不同的臂为1次正确交替反应,记录正确交替反应次数。自发交替反应率(％)二[正确交替反应次数/(N・2)]xl00o1.4实时荧光定量PCR行为学实验结束后,5组大鼠断头处死、取脑，并分离岀海马组织进行超声匀浆、提取总RNA、逆转录为cDNA、然后采用Re