genistein对aβ所致痴呆大鼠工作记忆的影响及机制探讨

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1、Genistein对Aβ所致痴呆大鼠工作记忆的影响及机制探讨原丽1郭小姝1解瑞2刘晓杰1李清山1刘燕1张翠英11.山西长治医学院生理教研室，山西长治046000；2.长治医学院附属和平医院眼科，山西长治046000[摘要]目的比较不同浓度染料木黄酮Genistein对痴呆模型大鼠认知功能的影响，并探讨可能的分子机制。方法50只SD大鼠随机分为对照组、DMSO组、Aβ1-40模型组、2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein治疗组。对照组，DMSO组侧脑室注射0.9%生理盐水，其余3组侧脑室注射Aβ1-42制备阿尔茨海默病（A

2、D）痴呆模型大鼠，1周后，不同剂量Genistein治疗组分别用2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein灌胃，DMSO组则用0.5%DMSO溶剂灌胃，对照组与Aβ1-40组分别用0.5%生理盐水灌胃，1次/d，连续四周后，通过Y迷宫试验测定各组大鼠工作记忆，利用RT-PCR分析大鼠海马组织中STAT3和Caspase-3mRNA相对表达量。结果单独给予Aβ1-40的大鼠在Y迷宫试验中自发交替反应率明显降低，海马STAT3的mRNA相对表达量明显降低，但Caspase-3mRNA相对表达量显著上升；低剂量Genistein组

3、逆转Aβ1-40形成的损伤，给予高剂量Genistein（20mg/kg）后，检测结果与Aβ1-40组差异无统计学意义。结论低剂量Genistein通过上调STAT3mRNA同时抑制Caspase-3基因表达拮抗了Aβ1-40诱导的神经毒作用，而高剂量Genistein表现出相反的效应与机制。以上提示，给予低剂量Genistein可能有助于预防或延缓AD患者认知功能的衰退。.jyqkyloidpeptides，Aβ)在脑内沉积是阿尔茨海默病（Alzheimer＇sdisease，AD）发生发展的重要病理基础，最终患者出现进行性的学习记忆

4、和认知功能障碍[4]。故该实验通过侧脑室注射Aβ1-40制备AD模型大鼠，观察不同剂量的Genistein对AD模型大鼠空间学习记忆和工作记忆的影响，并探讨其可能的机制。现报道如下。1材料与方法1.1动物及给药3月龄的健康雄性SpragueDaa公司产品，Aβ1-40溶于0.9%的生理盐水，Genistein溶于0.5%二甲基亚砜(DMSO)，SD大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)后，固定暴露颅骨，参照脑立体定位图谱，侧脑室给药；Genistein灌胃1次/d，坚持4周。1.2实验分组随机将SD大鼠分为5组：0.9%生

5、理盐水组、0.5%DMSO溶剂组、25nmolAβ1-40组、2.0mg/kgGenistein+Aβ1-40组、20mg/kgGenistein+Aβ1-40。1.3Y迷宫测试Y迷宫由3个等长互为120°角的臂组成,随机定为A、B、C区。实验时将大鼠放入1个臂的末端,让其自由出入3个臂,记录持续8min，并记录大鼠进入各区的次序和总次数（N），以连续进入3个不同的臂为1次正确交替反应,记录正确交替反应次数。自发交替反应率(%)=[正确交替反应次数/(N-2)]×100。1.4实时荧光定量PCR行为学实验结束后，5组大鼠断头处死、取脑，

6、并分离出海马组织进行超声匀浆、提取总RNA、逆转录为cDNA、然后采用RealtimePCR以GAPDH为内参检测海马组织中STAT3和Caspase-3的mRNA相对表达量。引物设计具体见表1。1.5统计方法统计学分析采用SPSS18.0软件进行，所有数据用均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析的TukeyHSD法进行检验。2结果2.1各组大鼠短期工作记忆能力的比较该研究的实验结果显示（表2），各组大鼠在8min的自发交替试验中进入Y迷宫3个臂的总次数之间差异无统计学意义（P>0.01），表明药物的给予并没有影响动物的自

7、发活动。但与正常对照组相比较，Aβ1-40组大鼠自发交替反应率明显降低（P=0.0001），0.5%DMSO溶剂组与对照组差异无统计学意义(P>0.01)；与Aβ1-40组相比，Genistein低剂量组（2mg/kg）大鼠的自发交替反应率显著增加（P=0.000），高剂量组（20mg/kg）大鼠的自发交替反应率差异无统计学意义（P>0.01）。2.2各组大鼠海马组织STAT3和Caspase-3mRNA相对表达量的比较如图1A所示，正常对照组中，STAT3和Caspase-3的mRNA相对表达量分别是（0.99±0.03）

8、和（1.0±0.02）,0.5%DMSO组则分别是（0.97±0.05）与（1.01±0.06），两组之间差异无统计学意义（P>0.01），但与对照组相比，Aβ1-40组STAT3mRNA相对表达量显