ApoE基因的检测方法.ppt

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1、ApoE的检测方法112158cyscyscysargargε2ε3ε4TGC，cysCGC，argcodon：112/158TGCTGCTGCCGCCGCargCGCE2(T/T)E3(T/C)E4(C/C)E2(T/T)E2/E2(TT/TT)E2/E3(TT/TC)E2/E4(TC/TC)E3(T/C)E3/E3(TT/CC)E3/E4(TC/CC)E4(C/C)E4/E4(CC/CC)测序ARMS-PCRPCR-SSCPPCR-RFLPQ-PCRT/CT/C112158TCCTP1P2P3P45'3'上游引物P5下游引物A管：P1、P3、P5B管：P2、P4、P512345612

2、345611、22、33、44、55、66分别代表基因型E2/E2、E2/E3、E2/E4、E3/E3、E3/E4、E4/E4ARMS-PCRPCR-SSCP单链构象多态性(SSCP)是在非变性聚丙烯酰胺凝胶上，根据短的单链DNA或RNA分子碱基序列不同形成的不同构象；一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变,形成多态性。E2/E2：A,A1E2/E3：A,A1,B,B1E2/E4：A,A1,C,C1E3/E3：B,B1E3/E4：B,B1,C,C1E4/E4：C,C1PCR-RFLPGCGCCGCGABCDEE2：····T····T···片段AE3：····T····

3、C···片段E、DE4：····C····C···片段B、C、D112位：···GT/CGC····158位：···GC/TGC····E2/E2：AE2/E3：A,D,EE2/E4：A,B,C,DE3/E3：E,DE3/E4：B,C,D,EE4/E4：B,C,DQ-PCRFRprobeprobeTTTCCCTTE2/E2(TT/TT)E2/E3(TT/TC)E2/E4(TC/TC)TC---E3/E3(TT/CC)E3/E4(TC/CC)CC------E4/E4(CC/CC)RocheSNPGenotypingIntroduction融解曲线分析的原理融解曲线分析的结果判读单色荧光对

4、ApoE分型双色荧光对ApoE分型codon：112codon：158