迟缓爱德华氏菌抗原蛋白FBA在毕赤酵母中的重组表达及抗原表位筛选.pdf

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1、ｔ程赖±学位论受ｉ论文题目：迟缓爱德华厌菌抗原蛋白ＦＢＡ在毕赤酵母中的重组表达及抗原表位筛选二工程领域；二勺海洋輸学ｉ研究方向：．鲍盼瑞？ｉ论义作者吴海珍副教授学校导航ＩＩ－－缪贿高级工程师企业导师．．＂；稱‘＾詞．；；＞？．Ｊ馬２０１５０４２１定稿日期：年月日学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华东理工大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，

2、可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论；密情况：＾／因不保密□保豁保密期（年日至年）＿＿月＿＿＿＿月＿日学位论文作者签名：指导老师签名；日期；年诚月讀日日期；年ｒ月曰＞￥：Ｊ嗦分类号：密级：ＵＤＣ：华东理工大学工程硕±学位论文迟缓爱德华氏茵抗原蛋白ＦＢＡ在毕赤醇母中的重组表达及抗原表位筛选鲍盼指导教师姓名：吴海珍副教授华东理工大学－－生物申请学位级别；硕±工程领ｍ工程论文定稿日期；２０１５．０４．２１论文答辩日期：２０１５．０５．２５学位授

3、予单位：华东理工大学学位授予日期：答辩委员会主席：圧英萍评闽人：王启要周葫明作者声明我郑重声明：。本人恪守学术道德，崇尚严谨学风所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的结果。除文中明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何他人已经发表或撰写过的内容。论文为本人亲自撰写，并对所写内容负责。论文作者签名：年４月》《曰。）咬华东理王大学硕±学位论文第Ｉ页迟缓爱德华巧菌抗原蛋白ＦＢＡ在毕赤薛母中的重狙表达及抗原表位筛选摘要迟缓爱德华氏菌是海水养殖鱼类的主要致病菌，属胞内寄生菌，传统抗生素难Ｗ防治，

4、本实验室致力于研究其致病机制和疫苗的开发。前期研究发现，通过大肠杆菌重组１６－二表达该病原菌的持家酶果糖，，憐酸醒缩酶ｆＢＡ）免疫斑马鱼和大菱巧后，对＆／Ｖ１Ｗ波姑／ａｆ口Ｗａ均具有较好的免疫保护为，是爱德华氏菌病亚单位疫苗开发的优良候选抗原。使用大肠杆菌进行重组表达会产生内毒素。本文将抗原蛋白ＦＢＡ在毕赤酵母中进行重组表达，Ｗ期避免内毒素问题并且实现抗原蛋白ＦＢＡ大规模制备，进而将其应用。本工作完成Ｔ重组表达ＦＢＡ的毕赤醇母菌株ＧＳ－于水产养殖新型疫苗开发中１１５Ｐ－ＩＣ化：ａ和ＧＳ１１５ｐＧＡＰＺａＡ：ｋ？的构建，摇瓶培养条件下检测甲醇诱导型重组毕

5、赤ｐ诉；／－Ｓ１１５ＰＩＣ９Ｋ酵母ＧＰ：辦口对ＦＢＡ蛋白的表达情况，发现经甲醇诱导后重组ＦＢＡ能被成－Ｐ功诱导表达。随后将ＧＳ１１５ＰＩＣ９Ｋ：听ａ经５Ｌ发酵罐培养，发酵液上清中ＦＢＡ的浓度可达１．０６ｇ／Ｌ，并通过镇柱亲和层析完成了其纯化。对纯化后的重组ＦＢＡ进行免疫效果评价，其免疫斑马鱼和大菱鲜后均具有较好的免疫保护效力。并且重组酵母表达的ＦＢＡＦＢＡ—样和重组大肠杆菌表达的，也能与免疫ＦＢＡ的大菱鲜抗血清产生明显的反应。上述结果表明毕赤酵母表达的抗原蛋白ＦＢＡ也具有较好的免疫原性，为后续ＦＢＡ的规模化制备及其亚单位疫苗的开发奠定了基础。ＦＢ

6、Ａ蛋白在众多细菌中具有较高的同源性，筛选得到ＦＢＡ的抗原表位可为多病原感染的水产养殖业提供新型疫苗设计的靴点。本文对迟缓爱德华氏菌的ＦＢＡ进行了抗原表位的初步筛选。首先通过表位预测ＢｅｉＰｒｅｄ１．化软件在线预测了ＦＢＡ抗原表位可ｐ能的氨基酸位点。其次构建了八个框内部分缺失的ＡＦＢＡ蛋白大肠杆菌表达菌株并对其进行了表达与纯化。之后免疫斑马鱼后比较了这八个蛋白免疫保护力。最后将这八个框内缺失的ＡＦＢＡ蛋白包被９６孔板，Ｗ免疫阳Ａ的大菱鲜抗血清进行化ＩＳＡ检测。由Ｓ？方面结果分析得出，ＦＢＡ蛋白的１８１２４０位氨基酸对其免疫保护效力贡献最显著，可能是抗原

7、关键表位肤存在的区域。关键词：迟缓爱德华氏菌；ＦＢＡ；毕赤酵母重组表达抗原表位；；第ＩＩ页华东理工欠学硕±学位论文ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰｉｃｈｉａａｓｔｏｒｉｓａｎｄＥｉｔｏｅＳｃｒｅｅｎｉｎｏｆＡｎｔｉｅｎＰｒｏｔｅｉｎＦＢＡｐｐｐｇｇ石ｒｏｍＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ細ｒｄａＡｂｓｔｒａｃｔＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔａｔｈｏｅｎｓｏｆｍａｒｉ