β-乳球蛋白抗原表位谱的解析与关键抗原表位串联体的重组表达与鉴定

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1、天津医科大学硕士学位论文最主要表位的氨基酸序列为AA76-95、AA1-20、AA106-125，主要表位的氨基酸序列为AA91-110、AA61-81、AA121-140，次要表位的氨基酸序列为AA46-65、AA31-50、AA151-162。（2）β-乳球蛋白关键抗原表位串联体重组蛋白的表达及鉴定：通过DNAStar软件对理论上6种组合方式进行了分析，得到最佳组合方式，成功构建了大肠杆菌原核表达载体，IPTG诱导表达后，获得大小为36kDa左右的融合蛋白，并纯化得到单一组分的36kDa大小的重组蛋白，并经免疫印

2、迹法、斑点印迹法鉴定其免疫活性，并利用重组蛋白作为检测抗原建立了一种活性氧传递均相发光免疫测定技术来检测血清sIgE。结论：本研究对牛奶主要过敏原β-乳球蛋白的抗原表位进行了解析，不同牛奶过敏患者血清所识别的抗原表位具有异质性。成功表达了β-乳球蛋白关键抗原表位串联体重组蛋白，并鉴定了关键抗原串联体重组蛋白具有良好的免疫学活性，在检测牛奶过敏疾病中有可能代替天然抗原，为新一代诊断试剂的制备奠定基础。关键词：牛奶过敏β-乳球蛋白特异性IgE抗原表位重组表达II万方数据天津医科大学硕士学位论文AbstractObject

3、ive:SerumspecificIgEisacommonmeansofdiagnosisoffoodallergy,StandardizationofknownantigenistheimportantpreconditionfordevelopmentofspecificIgEinvitrodiagnosticreagentsandthedevelopmentoffoodcomponentsofantigenepitoperecombinantisanimportantmeasuretosolvethestand

4、ardizationofantigen.Inthisstudy,themostimportantmilkallergen"β-lactoglobulin"asanexample,startingfromtheanalysisofitsepitopes,andanalyzetheimportantantigenepitopeandthepatientsserumsIgEresponsefrequency,thustoselectkeyepitopesandbuildkeyepitopesrecombinantandtr

5、ythepossibilityofusingepitoperecombinantproteininsteadofnaturalprotein.Methods:(1)β-lactoglobulinkeyepitopesscreeningandserumheterogeneityanalysis:First,intheNCBIdatabasesearchedmilkallergensβ-lactoglobulinaminoacidsequence(162aminoacids),thenentrustedGL(Shangh

6、ai)BiochemLtdsynthesisantigenepitopesbytheendoftheoverlap.20aminoacidsofapolypeptide,twoadjacentoverlappingpeptidesof5aminoacids;ThepolypeptidepointedonnitrocellulosemembraneandthespecificIgEinmilkallergypatientsserumasa"probe".Toobservepolypeptideresponsefrequ

7、encydifferencebetweenpatientswithmilkallergyandpeptideidentificationbyanydifferencesbetweendifferentindividuals.(2)β-lactoglobulinkeyantigenepitoperecombinanttandemofbuildinganditspreliminaryapplicationresearch:Thehighestresponsefrequencyofthreepolypeptideexpre

8、ssedinseries,betweenadjacenttwopeptidesdojointwithaglycine.FirstusingDNAstarbioinformaticssoftwaretoforecastthreetablesof6kindsofcombinationandselectingthebestcombination;Th