迟缓爱德华氏菌抗原蛋白fba在毕赤酵母中的重组表达及抗原表位筛选

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1、t程赖±学位论受i论文题目:迟缓爱德华厌菌抗原蛋白FBA在毕赤酵母中的重组表达及抗原表位筛选二工程领域;二勺海洋輸学i研究方向:.鲍盼瑞?i论义作者吴海珍副教授学校导航II--缪贿高级工程师企业导师..";稱‘^詞.;;>?.J馬20150421定稿日期:年月日学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查

2、阅和借阅。本人授权华东理工大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可W采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论;密情况:^/因不保密□保豁保密期(年日至年)__月____月_日学位论文作者签名:指导老师签名;日期;年诚月讀日日期;年r月曰>¥:J嗦分类号:密级:UDC:华东理工大学工程硕±学位论文迟缓爱德华氏茵抗原蛋白FBA在毕赤醇母中的重组表达及抗原表位筛选鲍盼指

3、导教师姓名:吴海珍副教授华东理工大学--生物申请学位级别;硕±工程领m工程论文定稿日期;2015.04.21论文答辩日期:2015.05.25学位授予单位:华东理工大学学位授予日期:答辩委员会主席:圧英萍评闽人:王启要周葫明作者声明我郑重声明:。本人恪守学术道德,崇尚严谨学风所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的结果。除文中明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何他人已经发表或撰写过的内容。论文为本人亲自

4、撰写,并对所写内容负责。论文作者签名:年4月》《曰。)咬华东理王大学硕±学位论文第I页迟缓爱德华巧菌抗原蛋白FBA在毕赤薛母中的重狙表达及抗原表位筛选摘要迟缓爱德华氏菌是海水养殖鱼类的主要致病菌,属胞内寄生菌,传统抗生素难W防治,本实验室致力于研究其致病机制和疫苗的开发。前期研究发现,通过大肠杆菌重组16-二表达该病原菌的持家酶果糖,,憐酸醒缩酶fBA)免疫斑马鱼和大菱巧后,对&/V1W波姑/af口Wa均具有较好的免疫保护为,是爱德华氏菌病亚单位疫苗开

5、发的优良候选抗原。使用大肠杆菌进行重组表达会产生内毒素。本文将抗原蛋白FBA在毕赤酵母中进行重组表达,W期避免内毒素问题并且实现抗原蛋白FBA大规模制备,进而将其应用。本工作完成T重组表达FBA的毕赤醇母菌株GS-于水产养殖新型疫苗开发中115P-IC化:a和GS115pGAPZaA:k?的构建,摇瓶培养条件下检测甲醇诱导型重组毕赤p诉;/-S115PIC9K酵母GP:辦口对FBA蛋白的表达情况,发现经甲醇诱导后重组FBA能被成-P功诱导表达。随后将GS115PIC9

6、K:听a经5L发酵罐培养,发酵液上清中FBA的浓度可达1.06g/L,并通过镇柱亲和层析完成了其纯化。对纯化后的重组FBA进行免疫效果评价,其免疫斑马鱼和大菱鲜后均具有较好的免疫保护效力。并且重组酵母表达的FBAFBA—样和重组大肠杆菌表达的,也能与免疫FBA的大菱鲜抗血清产生明显的反应。上述结果表明毕赤酵母表达的抗原蛋白FBA也具有较好的免疫原性,为后续FBA的规模化制备及其亚单位疫苗的开发奠定了基础。FBA蛋白在众多细菌中具有较高的同源性,筛选得到FBA的抗原表位

7、可为多病原感染的水产养殖业提供新型疫苗设计的靴点。本文对迟缓爱德华氏菌的FBA进行了抗原表位的初步筛选。首先通过表位预测BeiPred1.化软件在线预测了FBA抗原表位可p能的氨基酸位点。其次构建了八个框内部分缺失的AFBA蛋白大肠杆菌表达菌株并对其进行了表达与纯化。之后免疫斑马鱼后比较了这八个蛋白免疫保护力。最后将这八个框内缺失的AFBA蛋白包被96孔板,W免疫阳A的大菱鲜抗血清进行化ISA检测。由S?方面结果分析得出,FBA蛋白的181240位氨基酸对其免疫保护效

8、力贡献最显著,可能是抗原关键表位肤存在的区域。关键词:迟缓爱德华氏菌;FBA;毕赤酵母重组表达抗原表位;;第II页华东理工欠学硕±学位论文ExpressioninPichiaastorisandEitoeScreeninofAntienProteinFBApppgg石romEdwardsiella細rdaAbstractEdwardsiellatardaisoneofthemostimportantathoensofmari

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