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1、骨髓间充质干细胞经慢病毒转染绿色荧光蛋白后的体内观察作者：樊守刚，吴小涛，王运涛，李果【摘要】目的：观察经慢病毒转染绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)移植注入兔椎间盘后的荧光时效性。方法:体外培养并纯化BMSCs,并用含有GFP标记的重组慢病毒载体(LentivirusGFP)转染后移植入兔椎间盘，在移植后2、4、6、8、10、12周用激光共聚焦显微镜观察BMSCs荧光强度及细胞增殖情况,考察慢病毒转染GFP体内荧光维持时间。结果:经慢病毒转染GFP后的BMS
2、Cs,荧光显微镜下48h开始显现绿色荧光，72h荧光亮度达到最高。植入体内后8周内均能用激光共聚焦显微镜观察到绿色荧光,8周后荧光强度开始逐渐减弱，第2、4、6、8、10、12周6个时间点GFPBMSCs的阳性率分别是(21.75±1.32)%、(33.07±3.53)%、(33.20±3.60)%、(29.90±4.23)%、(19.64±2.93)%和(10.91±3.43)%。结论:BMSCs在椎间盘微环境中能够稳定增殖，用慢病毒转染GFP的方法能在至少8周内可靠示踪其在椎间盘内的存活状态，8周后荧光强度开始逐渐减弱。【关键词】椎间盘退变；骨髓间充质干细胞；慢病毒；绿色荧光蛋白tra
3、cedbyGFP[Abstract]Objective:Toobservethefluorescencetimelinessofbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)transfectedgreenfluorescentprotein(GFP)intherabbitintervertebraldiscaftertransplanted・Methods:BMSCswereculturedandpurified,andtransfectedwithGFPcontainedrecombinantlentiviralvector(LentivirusGFP)in
4、vitro・ThefluorescenceintensityofBMSCsandcel1proliferationwerestudiedaftertransplantedintotherabbitintervertebraldiscinvivobyconfocallasersignificantlymicroscope・Results:GreenfluorescenceofGFPinBMSCswascollected48hoursaftertransfectedwithGFP,andgotthehighestfluorescent1ightat72hour.Invivogreenfluor
5、escencecouldbeobtainedbyconfocallasermicroscopewithin8weeksafterimplantation,andthefluorescenceintensitybegantoweakenafter8weeks・ThepositiveratesofGFPBMSCsat2,4,6,8,10,12weekswere(21.75±1.32)%,(33.07±3.53)%,(33.20±3.60)%,(29.90±4.23)%,(19.64±2.93)%and(10.91±3.43)%.Conclusion:Thestabileproliferatio
6、nofBMSCscanbeobtainedintheintervertebraldiscmicroenvironment,andcanbereliablylentiviraltransfectionatleastwithin8weeks,afterwhichthefluorescenceintensitybegantostepdown.[Keywords]intervertebraldiscdegeneration;bonemarrowmesenchymalstemcel1s;Lentivirus;greenfluorescenceprotein椎间盘退变是引起下腰痛的常见病因之一，骨髓间
7、充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)移植是近年生物治疗椎间盘退变的研究热点，其在小动物实验中已取得肯定疗效[1],但尚未在大动物实验及临床试验水平有成功报道，在这一技术应用于临床之前，细胞移植本身的排异、BMSCs移植后的去向、存活与分化状态、细胞对髓核内环境的影响以及BMSCs与髓核细胞(nucleuspulposus,NPs)间的相互作用等众多问题尚有待研究，而研究这
