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时间:2020-03-15
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1、Nephrin>TGFB1和WT1在阿霉素肾病模型肾小球中的表达及意义作者:杨维娜,任淑婷,成少利,张耀杰,于琳华,郭尚温,李恒力【摘要】目的探讨足细胞的数量及nephrin.转化生长因子B1(TGFBl)蛋白在阿霉素肾病模型肾小球中的表达及意义。方法建立阿霉素诱导的大鼠肾病模型,于不同实验时间点检测血、尿生化指标;光镜、电镜观察肾脏的组织病理学改变;免疫组化技术检测足细胞数量、nephrin、TGFBl蛋白的表达情况。结果该模型的肾脏病理学改变明显;1周末足细胞nephrin表达减弱(P【关键词】阿霉素肾病;nephrin;转化生长因子B1;足细胞ABSTRACT:Obje
2、ctiveToinvestigatepodocytenumber,theexpressionofnephrinandtransforminggrowthfactorB1(TGFBl)inadriamycininducednephropathyratmodelanditssignificance・MethodsTheratadriamycinnephrosismodelwasconstructedtodetectbloodandurinebiochemicalindicatorsandobservethepathologicalchangesofrenaltissuesbyli
3、ghtmicroscopeandelectronmicroscope・TheexpressionlevelsofnephrinandTGF31aswellasthepodocytenumberwereexaminedatdifferenttimepointsbyimmunohistochemistry.ResultsThepathologicalchangesoftherenaltissueswereobvious・Nephrinpresentedaweaksignalattheendofthefirstweek(PKEYWORDS:adriamycinnephropathy
4、;nephrin;transforminggrowthfactorB1;podocyte目前,足细胞损伤与肾小球疾病关系的研究已成为探索肾小球疾病发病学的热点[1]。研究表明,足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达异常与蛋白尿的发生密切相关[2]。转化生长因子B1(transforminggrowthfactorBl,TGFBl)被认为是致肾纤维化的重要细胞因子之一。文献报道,肾小球蛋白高滤过可以诱导足细胞分泌TGFBl[3],提示足细胞可能通过TGFB1对肾小球疾病的进展起重要的调节作用。我们前期的研究发现,足细胞数量减少启动了局灶节段性肾小球硬化(focalsegmenta
5、lglomerulosclerosis,FSGS)的发生。但足细胞的数量减少到多少可以启动FSGS的发生?Nephrin.TGFBl在肾小球疾病的发生发展过程中是如何变化的?这些问题目前尚不清楚。为此,本研究拟建立改良的阿霉素肾病模型,延长观察时间至12周,以便连续动态观察阿霉素肾病的病变特点、进展变化、足细胞数量及nephrin.TGFB1的表达情况,旨在进一步探讨足细胞损伤引发蛋白尿的机制及其在FSGS发生发展中的作用。1材料与方法实验动物及试剂健康清洁级雄性SD大鼠60只,体重180〜220g(西安交通大学医学院实验动物中心提供);注射用盐酸阿霉素10支(浙江海正药业股
6、份有限公司);兔抗大鼠nephrin抗体、兔抗大鼠TGFB1抗体、兔抗大鼠WT1抗体(SantaCraz生物工程有限公司);即用型非生物素免疫组化ElivisionTMplus检测试剂盒(福州迈新生物工程公司)。方法动物模型的制作及分组实验前大鼠适应性标准饲养3d,其后随机分为阿霉素肾病模型组(40只)和正常对照组(20只)。模型组于实验开始后第1天、第14天分别从尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)4mg/kg(ADR按2g/L溶于生理盐水中);对照组于相同时间分别从尾静脉注射等容积生理盐水。放入代谢笼内饲养,自由摄食、饮水。从第2次注射后连续观察至12周末。存
7、活的大鼠于第2次注射ADR后的7、14d时检测尿蛋白,尿蛋白定量>100mg/24h提示模型复制成功。期间3只大鼠死亡,1只制备模型失败,被剔除。大鼠的血、尿生化检测各组均于第1次ADR注射前Id、第2次ADR注射后1周末、4周末、8周末及12周末用代谢笼收集24h尿液检测尿蛋白。模型组于收集尿液结束当天每次随机取大鼠10只、对照组相应每次随机取大鼠5只,乙瞇吸入麻醉,心脏穿刺采血,检测血清总蛋白(totalprotein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、胆固醇(cholesterol,Cho
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