临检血液学-—3贫血检验方法.ppt

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1、第四章红细胞检验技术第五节～第八节广州医科大学附属第二医院邓小燕WHO?金喜善HA地点：夜班急诊室医生工作站砰的一声，门外护士急匆匆地领进来一家3口，患病的是小男孩，一岁半，面色惨白如纸，神情极度疲倦。没有哭闹，没有挣扎，连眼皮都不抬一下。家长告知孩子昨天发高烧，便自行跑到药房买退烧药给孩子吃。问吃了哪种药？正是尼美舒利。立即给孩子氧，抽血送检验科加急检查，血红蛋白只有22g/L。孩子溶血，检验的难度增大。等待血型鉴定的时间显得格外漫长。检验科的血型检测出来A型！输注A型洗涤红细胞悬液。孩子终于度过了重重难关。我们从死神手里抢回来了孩子的生命。溶血一般检验铁代谢检验叶酸和维生素B12检验红细

2、胞膜缺陷的检测红细胞酶缺陷的检验免疫性溶血性贫血检验血红蛋白异常的检验阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验第五节红细胞酶缺陷的检验G6PD荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光点试验和活性测定高铁血红蛋白还原试验变性珠蛋白小体生成试验谷胱甘肽还原酶缺陷检测G-6-PD基因检测原理:G6PD使NADP还原成NADPH,后者在紫外线照射下发出荧光（260～365nm）；NADPH在340nm处有一吸收峰，可通过单位时间生成的NADPH的量，计算G6PD活性。参考值：正常人强荧光；Chapman-Dern法酶活性2.8～7.3IU/gHb一、G6PD荧光斑点试验和活性检测G6PD荧光斑点试验和活性检测荧光斑

3、点适用于筛查;活性测定对G6PD缺陷诊断有较高特异性和灵敏度WHO推荐Zinkham法新生儿血和网织红细胞酶活性较高溶血发作期酶活性增高二、高铁血红蛋白还原试验（MHb-RT）原理：亚铁Hb高铁Hb◎RBC中的G6PD含量正常时，己糖旁路形成的NADPH作为MHb还原酶的辅酶，在递氢体-美蓝参与下，可使MHb还原为亚铁血红蛋白◎G6PD缺乏，则MHb不能还原本法仅作为过筛试验，其特异性和敏感性均不高，条件时应直接测定G6PD活性。亚硝酸盐临床意义：>=75%正常人（脐带血>=77%）31%~74%中间反应型（杂合子）<30%G6PD显著缺陷（半合子或纯合子）三、变性珠蛋白小体生成试验●又称红

4、细胞包涵体、Heinz小体、海因小体●原理：G-6PD缺乏致红细胞内GSH减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体，沉着红细胞膜上本法仅能作为过筛试验抗凝血+乙酰苯肼37℃温育2～4h充分氧化Hb氧化成Heinz小体（结晶紫、甲紫或煌焦油兰）1.正常人＜30%2.G6PD缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%结果：小体为圆形或多角形色涵体，多位于红细胞边缘，以含5个以上小体的红细胞计数第五节红细胞酶缺陷的检验G6PD荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光点试验和活性测定高铁血红蛋白还原试验变性珠蛋白小体生成试验谷胱甘肽还原酶缺陷检测G-6-PD基因检测溶血一般检验铁代谢检验叶酸和维生素B

5、12检验红细胞膜缺陷的检测红细胞酶缺陷的检验免疫性溶血性贫血检验血红蛋白异常的检验阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验第六节、免疫性溶血性贫血的检验抗人球蛋白试验冷凝集素试验冷热溶血试验一、抗人球蛋白试验临床意义：1）AIHA重要指标：温抗体型IgG为主；直接试验（+）间接试验（-）2）其他：如冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血、PNH等直接试验（+）3）新生儿同种AIHARh血型不合者直接、间接（+）ABO血型不合者（-）二、冷凝集素试验冷凝集素综合症患者血清中存在冷凝激素（IgM），在低温(0～4℃）时使自身红细胞、O型红细胞或受检者同型红细胞发生凝集，当温度上升(37℃）后凝集现象消失。缗钱

6、状分布红细胞成熟红细胞随机呈块状或束状聚集，主要表现1.多种抗体暴露；2.HA（自身免疫性）；3.非典型肺炎；4.金葡菌感染；5.冷凝集疾病。三、冷热溶血试验阵发性寒冷性血红蛋白尿征患者体内含有寒冷性溶血抗体(IgG)，在4℃条件下作用于自身红细胞后，即吸收补体造成溶血。将病人的血清置于冰箱中一些时间，再置于室温中，可出现溶血现象。这种先在低温时结合抗原并固定补体，在37℃时才表现溶血的抗体，又叫“双相抗体”（D-L抗体）过筛试验第六节、免疫性溶血性贫血的检验抗人球蛋白试验冷凝集素试验冷热溶血试验溶血一般检验铁代谢检验叶酸和维生素B12检验红细胞膜缺陷的检测红细胞酶缺陷的检验免疫性溶血性贫血

7、检验血红蛋白异常的检验阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验第七节血红蛋白异常的检验抗碱血红蛋白检测HbF酸洗脱法检测红细胞包涵体试验异丙醇沉淀试验血红蛋白电泳PCR技术检测血红蛋白基因一、抗碱血红蛋白检测HbF抗碱变性的能力比HbA、HbA2强，在Hb液中加入定量的碱液后，HbA、HbA2即发生碱变性，可被半饱和硫酸铵沉淀，HbF因具有抗碱性仍留在溶液中，可用比色法测定其含量。参考值：成人1%～3.1%新生儿55%～