肿瘤的分子生物学检验.ppt

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1、肿瘤的分子生物学检验2015.11.30肿瘤标志物的研究历史第1阶段（1963-1978）：癌胚性抗原1963年AbelevAFP1965年Gold&FreemanCEA第2阶段（1979-1989）：糖链抗原为主1980年KoprowskiCA19-9（1116-NS-19-9）1981年BastCA125（OC125）第3阶段（1990以后）：基因标志肿瘤基因标志2一、原癌基因(oncogene，onc)及其表达产物的作用1、定义：原癌基因是指人类或其他动物细胞（以及致癌病毒）固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。原癌基因包括病毒癌基

2、因（v-onc）和细胞癌基因（c-onc）两种，它们在正常情况下以非激活的形式存在，故称原癌基因。负责调控正常细胞的生命活动，包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细胞存活以及DNA转录等。一旦这类基因发生某些错误或功能丧失时，极易导致原癌基因转变为可使正常细胞转化为肿瘤的转化基因或癌基因。342、特点：（1）v-onc是病毒基因组中特殊的核苷酸序列，能引起细胞转化（2）c-onc是存在于正常细胞基因组中的癌基因，在正常情况下处于静止或低表达的状态，不仅对细胞无害，而且对维持细胞正常功能具有重要作用，但在异常表达时，其产物可使细胞无限制分裂5细胞

3、癌基因与病毒癌基因核酸序列有同源性即它们的DNA序列是相对应的，表达产物也基本相同细胞癌基因的作用：通过其表达产物蛋白质来体现的，负责调控正常细胞的生命活动，包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细胞存活以及DNA转录等。67二、癌基因定义：原癌基因在进化上高度保守，负责调控正常细胞的生命活动，包括细胞增生、生长因子信号传递、细胞周期进展、细胞存活以及DNA转录等。一旦这类基因发生某些错误或功能丧失时，极易导致原癌基因转变为可使正常细胞转化为肿瘤的转化基因或癌基因三、原癌基因的激活机制原癌基因具有正常的生理功能，被激活时又具有致癌能力，因此研究原癌基因如何

4、被激活是很重要的。现已证实射线辐射化学致癌剂病毒感染8(一)原癌基因点突变(pointmutation)癌基因在编码顺序的特定位置上的某一个核苷酸发生突变，使其表达蛋白质中相应的氨基酸发生变化，从而获得了转化细胞的活性9mutation(二)原癌基因获得外源启动子而激活肿瘤细胞中原癌基因的表达水平可以其转录的mRNA或翻译产物蛋白质的含量来表示在原癌基因的上游插入外源性启动子或增强子可激活原癌基因，使其表达产物增多病毒的增强子常位于5’端的长末端重复序列(1ongterminalrepeat，LTR)内。如果增强子插入到原癌基因的附近或远处，均使之激活，促

5、使癌基因的表达比正常表达增高几十甚至上百倍10(三)原癌基因甲基化程度降低而激活DNA分子中的甲基化(methylation)对阻抑基因的转录具有重要作用11现已发现在结肠腺癌和小细胞肺癌的细胞中，ras基因的DNA甲基化水平比其邻近的正常细胞明显偏低，提示某些原癌基因是由于甲基化程度降低而激活12(四)原癌基因的拷贝数增加基因扩增(amplification)：某些癌基因通过一些机制在原来的染色体上复制多个拷贝，超出了正常细胞的癌基因剂量，导致基因产物的增加，从而使细胞正常功能紊乱例如：人视网膜母细胞瘤：N-myc扩增了10-200倍，相应的mRNA和蛋白质

6、产物也都大量增加13(五)基因易位或重排使原癌基因激活基因易位（translocation）基因重排（rearrangemant）：有些癌基因从其染色体的正常位置转移到另一染色体的某个位置，由于调控环境发生变化，导致从相对静止状态变成激活状态，使原癌基因表达产物显著增加而导致肿瘤的发生14染色体易位使位于9q34的c-abl基因转移到第22对染色体上，重排形成bcr-abl融合基因，使表达增高，蛋白质产物也由p145变成p210，其酪氨酸蛋白激酶活性大为增加，导致慢性粒细胞白血病的发生15四、抑癌基因抑癌基因(suppressergene)又称抗癌基因(anti-

7、onc)，是存在于正常细胞内的一类可抑制细胞生长的基因，并有潜在抑癌作用。当这类基因发生突变、缺失或失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生16（一）抑癌基因及其表达产物抑癌基因与调控细胞分裂和分化过程相关，可能与生长因子、某些蛋白激酶类活性密切相关，只是抑癌基因给予细胞的信号与原癌基因相反17（二）抑癌基因失活机理1、视网膜母细胞瘤(retino-blastoma，Rb)（1）特点：★基因组成：27个外显子，3-17外显子区域是基因重组和突变的热点★编码：p105的蛋白质，其有结合DNA的活性，可受多种激酶系统催化而发生磷酸化1819（