植物组织培养技术 教学课件 作者 刘弘 6-3.ppt

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1、ZW4主编6.3.1　柑橘脱毒与快繁6.3.2　葡萄脱毒与快繁6.3.3　苹果脱毒与快繁6.3.4　香蕉脱毒与快繁6.3.5　枇杷离体快繁6.3.6　草莓脱毒与快繁6.3.7　树莓离体快繁6.3.8　甘蔗脱毒与快繁6.4.1　马铃薯脱毒与快繁6.3.1　柑橘脱毒与快繁1.茎尖微芽嫁接法脱毒2.茎尖培养脱毒3.柑橘胚胎培养4.柑橘快繁实例1.茎尖微芽嫁接法脱毒(1)准备接穗　用于柑橘茎尖微芽嫁接的接穗可采用以下两种方法获取：①直接从田间生长旺盛的植株嫩梢上剪取1.5～3.0cm长的芽梢，用自来水冲洗干净。(2)培养砧木　选取充实饱满、

2、无病虫的柑橘砧木种子，如枳壳、枳橙等种子，用自来水冲洗干净，再用纱布包好，放入45℃温水中预泡5min，再用55℃热水浸泡50min。小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒线.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒线.eps(3)嫁接　可采用的嫁接方法有：倒“T”形切接法、垂直压法、嵌芽腹接法。1)倒“T”形切接法。1.茎尖微芽嫁接法脱毒图6-1　茎尖微嫁接示意图a)倒“T”形切接法　b)垂直压法　c)嵌芽腹接法小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒线.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接

3、法脱毒线.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒图6-2　微茎尖嫁接苗液体纸桥培养示意图a)砧木　b)嫁接苗1.茎尖微芽嫁接法脱毒2)垂直压法。3)嵌芽腹接法。(4)嫁接苗培养和移栽　将嫁接好的幼苗移至装有MS液体培养基的平底试管中，用砧木幼苗胚轴穿过滤纸桥中间的小孔使其固定。小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒线.eps(5)病毒检测　无病毒苗的鉴定采用指示植物检测法、抗血清鉴定法、酶联免疫吸附法、核酸分析法、电镜法等。1.茎尖微芽嫁接法脱毒小贴士.eps1.茎尖微芽嫁接法脱毒线.eps2.茎尖培养脱毒(1)外植体取材、消毒与接种　选取生长

4、旺盛的柑橘新梢，去除叶片，用自来水冲洗干净，切取约2cm长的带芽茎段。(2)初代培养　采用MS无机盐＋叶酸0.1mg/L＋维生素H0.1mg/L＋维生素维生素B20.2mg/L＋蔗糖5％，再附加不同浓度的KT、NAA或2,4-D的培养基，可采用液体培养基，也可采用固体培养基。(3)植株再生　将初代培养形成的茎尖愈伤组织转接到添加ZT0.5mg/L和6-BA0.5mg/L的分化培养基中，使其分化形成丛生芽。小贴士.eps2.茎尖培养脱毒线.eps(4)生根培养　将茎尖分生组织诱导形成的丛生芽切割转接到生根培养基中诱导形成根，即可获得完

5、整植株。(5)驯化移栽　先将瓶苗移至温室或塑料大棚内炼苗1个星期，再取出小植株，洗净根部附着的培养基，移栽到草炭土、沙土按2∶1混合的基质中，并覆盖塑料薄膜，每天对叶片喷雾数次以保持湿度，待新叶长出后，去掉覆膜，进行常规管理。3.柑橘胚胎培养(1)合子胚培养　将幼胚接种于White＋IAA1.0mg/L＋水解酪蛋白600mg/L或MS＋GA31.0mg/L的培养基上，培养温度26℃，光照时间16h/d，合子胚可直接发育成完整植株。(2)珠心及珠心胚培养　幼果经消毒后,在无菌条件下剥取胚珠，切取珠心组织，接种于附加500mg/L麦芽浸

6、出液的MT或MS固体培养基中，诱导愈伤组织。4.柑橘快繁实例(1)据报道，蕉柑种子经表面消毒培养无菌苗，约20天苗龄，当苗长至一定大小时，取上胚轴切成长约1cm切段，将切段以形态学下端垂直插入诱导培养基MT＋BA1.0mg/L中进行离体培养诱导成芽，培养温度为(26±1)℃，光照时间16h/d。(2)据报道，从栽植5年的越橘苗木上剪取当年生萌动的枝条，用洗洁精水洗净材料表面的污物，再用自来水冲洗干净。(3)据报道，采集当年成熟的欧林达夏橙种子，用清水洗净表面粘液，在超净工作台上，用75％酒精消毒1min，再用0.15％的氯化汞溶液消

7、毒10min，无菌水冲洗3次，然后接种到垫有滤纸的三角瓶中培养。4.柑橘快繁实例小贴士.eps4.柑橘快繁实例线.eps6.3.2　葡萄脱毒与快繁1.葡萄脱毒苗培养2.葡萄离体快繁3.葡萄花药培养1.葡萄脱毒苗培养(1)茎尖培养脱毒　取1年生葡萄枝条，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗30min。小贴士.eps1.葡萄脱毒苗培养线.eps(2)热处理脱毒　将生根的小苗移入热处理室，在35～40℃人工培养箱中培养，处理时间视病毒种类不同而异。1.葡萄脱毒苗培养小贴士.eps1.葡萄脱毒苗培养线.eps(3)热处理结合茎尖培养脱毒　可将盆栽葡

8、萄苗先进行热处理，置于35～38℃的恒温箱内处理1～3个月，再剥取茎尖培养，脱毒率可达80％。(4)病毒检测　脱毒苗的鉴定采用指示植物检测法、抗血清鉴定法、酶联免疫吸附法、核酸分析法、电镜法等。2.葡萄离体快繁(1)外植体取材、消毒与