植物的组织培养技术课件

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1、专题3植物的组织培养技术自然界中存在着许多植物无性生殖的现象，如，马铃薯块茎能发芽生根，秋海棠叶片能长成新植株。嫁接1958年，斯图尔德用胡萝卜韧皮部细胞培养出完整植株。科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育为完整的植株。植物组织培养全能性1、概念高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整植株的潜能。2、全能性表达的条件1）离体2）一定的营养物质3）激素（主要是生长素、细胞分裂素）4）其他外界条件

2、（温度、酸碱度、光照等）3、全能性大小比较1）受精卵﹥生殖细胞﹥体细胞2）体细胞中：幼嫩细胞﹥成熟细胞细胞分化1、概念在生物的个体发育过程中，相同细胞的后代在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。2、本质基因的选择性表达3、结果形成不同的细胞和组织课题1菊花的组织培养基础知识一）植物组织培养的基本过程离体的植物器官、组织、细胞（外植体）脱分化愈伤组织再分化根芽植物体脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。即：由高度分化的植物组织或细胞

3、产生愈伤组织的过程。愈伤组织：细胞排列疏松无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。再分化：经脱分化形成的愈伤组织在一定的培养条件下，重新分化成根或芽等器官的过程。二）影响植物组织培养的因素1、外植体的选取1）不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。如：烟草和胡萝卜的组织培养较为容易，而枸杞愈伤组织的芽诱导就比较困难。2）对于同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。2、培养基常用的是MS培养基，成分包括：1）大量

4、元素：N、P、K、S、Ca、Mg2）微量元素：Fe、Mn、Zn、Cu、B、Mo、I、Co3）有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等4）植物激素（配制后添加）：生长素、细胞分裂素、赤霉素等其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。其浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。使用顺序不同使用量及比例不同使用的量及比例实验结果比例适中促进愈伤组织的生长生长素﹥细胞分裂素有利于根的分化、抑制芽的形成生长素﹤细胞分裂素有利于芽的分化、抑制根的形成你能说出各种营养物质

5、的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养要求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量的无机营养，包括植物生长必需的大量元素和微量元素。3、其他因素pH、温度、光照等进行菊花组织培养，一般控制pH在5.8左右，温度在18~22℃，并且每日用日光灯照射12h。实验操作培养外植

6、体消毒接种制备MS固体培养基移栽栽培一）制备MS固体培养基MS固体培养基成分及比例配制过程琼脂和水加热熔化加入蔗糖加入各种母液加蒸馏水定容调节pH分装灭菌二）外植体消毒取菊花嫩枝流水冲洗加洗衣粉刷洗流水冲洗20min70%酒精消毒6~7s无菌吸水纸吸干无菌水清洗0.1%氯化汞消毒消毒1~2min无菌吸水纸吸干无菌水冲洗至少3次三）接种1、接种室消毒接种前紫外线照射20min，70%酒精擦拭工作台。2、无菌操作操作在酒精灯火焰旁进行，每次使用器械后，都要用火焰烧灼灭菌。3、注意事项菊花茎段基部插入培

7、养基，利于吸收水分和养分；每瓶接种6~8块外植体。是否需要设置重复组和对照组？可做不同的材料或配方，但每种材料和配方至少要做一组以上的重复。对照实验可以取一个经灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一起培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。四）培养无菌箱中培养，期间定期消毒。培养条件：温度在18~22℃，并且每日用日光灯照射12h。五）移栽打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后移栽

8、到土壤中。六）栽培结果分析与评价分析外植体被污染的原因：1、取材老的材料比幼嫩材料带菌多，田间材料比温室材料带菌多。2、消毒不彻底植物组织内部所带细菌、霉菌等。3、人为污染操作失误导致，如工具未灭菌、手接触材料、接种室空气污染等。正常苗污染苗污染的预防措施（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁（一）防止外植体带菌1、选择好外植体采集时期和采集部位2、室内或无菌条件下进行预培养3、外植体严格消毒（二）保证培