植物组织培养技术ppt课件.ppt

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1、植物组织培养技术主讲：蒋贵生概述什么是植物组织培养：植物组织培养（Planttissueculture）是指在无菌条件下，将离体的植物器官（根、茎、叶、花等）、组织（如形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞），以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株，统称为植物组织培养。植物组织培养流程图植物组织培养的过程可概括为：脱分化再分化根、茎、叶外植体愈伤组织或完整植物胚状体⊙茎尖、茎段、胚及子房等器官做外植体可不经脱分化直接形成试管苗。⊙植物组织培养原理：

2、一是细胞的全能性；二是再生作用，与植物体分离的器官具有恢复完整植株的能力。⊙组织培养类型：愈伤组织培养、器官培养、茎尖培养、原生质体培养、悬浮细胞培养。如花药培养：培养离体花药易获得单倍体植物。植物组织培养技术是生物技术的重要组成部分，在生产实践及基因工程、遗传转化等研究中有重要应用前景。植物脱毒及离体快繁，花药培养与单倍体育种、幼胚培养与试管受精，抗性突变体的筛选与体细胞无性系变异，植物产品的工厂化生产等方面的研究和应用，均必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法。微繁有许多优势：①繁殖速度快，通常一年

3、内可以繁殖数以万计的，较为整齐一致的种苗，大大提高繁殖系数。特别对于难繁殖的园艺植物的名贵品种、稀有种质的繁殖推广具有重要意义。一个兰花的茎尖一年内可育成400万个原球茎，一个草莓茎尖一年内可育出成苗3000万株。②占用空间小，一间30平方米的培养室可以放置一万多个瓶子，足以同时繁殖几万株种苗。③可以培养脱毒种苗红芽芋种苗试管苗红芽芋栽培技术一、植物组织培养所需仪器设备1．实验室：药品室、称量室、洗涤室、配剂室、消毒室、接种室、培养室等。2．仪器设备：高压灭菌锅（器）、光照培养箱、振荡培养箱、电子天秤、

4、酸度计、超净工作台、煤汽炉、铝锅等。3．器械及用具：镊子、手术刀、接种针、细菌过滤器、牛皮纸、记号笔等。4．玻璃器皿：三角瓶、培养瓶、培养皿、量筒、容量瓶等。培养室超净工作台培养架实验室二、培养基的制备1．营养母液的配制在植物组织培养中，不同的植物，不同的器官和组织，不同的研究目的，使用不同的培养基，培养基尽管千差万别，按其性质和含量来分主要由以下几部分组成：①无机营养，包括大量元素和微量元素；②有机物质；③铁盐；④碳水化合物；⑤天然复合物；⑥激素；⑦琼脂（固体培养基）；⑧其他添加物。在培养基的配制

5、中，对各组分的成分，常先要按其需用量扩大一定倍数，配制成母液。MS培养基的配制配制培养基通常都按配方浓度的若干倍称量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，使用时按比例稀释。一般要配下列母液：大量元素母液微量元素母液铁盐母液植物生长物质母液有机化合物母液MS大量元素母液（10X）按扩大倍数分别称取各元素溶解后定溶在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。化学药品1升量10升量①NH4NO31650mg/L16．5g②KNO31900mg/L19．0g③CaCl2·2H2O440mg/L4．4g④MgSO4

6、·7H2O370mg/L3．7g⑤KH2PO4170mg/L1．7gMS微量元素母液（100X）按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3mg/L（21．4mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6mg/L86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L0．25mg④CuSO4·5H2O0．025mg/L0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25mg/L2．5mg⑥KI0．83mg/L8．

7、3mg⑦H3BO36．2mg/L62mgMS铁盐母液（100X）按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。化学药品1升量10升量Na2·EDTA37．3mg/L373mgFeSO4·7H2O27．8mg/L278mgMS有机物母液（100X）按扩大倍数称量溶解在1000ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。化学药品1升量10升量①烟酸0．5mg/L5mg②盐酸吡哆素（VB6）0．5mg/L5mg③盐酸硫胺素（VB1）④肌醇100mg/L1g⑤甘氨酸2mg/L20mg2、

8、激素母液配制各类激素用量极微，其母液一般配制成0.1～1mg/ml。有些激素配制母液时不溶于水，需经加热或用少量稀酸、稀碱及95%酒精溶解后再加水定容。常用激素类的溶解方法如下：萘乙酸（NAA）：先用热水或少量95%酒精溶解。吲哚丁酸（IBA）：先用少量95%酒精溶解后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）、（6-BA）：要先溶于1N盐酸。玉米素（ZT）先溶于95%酒精，再加热水。2,4－D：需用1NNaOH溶解再