专题3植物的组织培养技术ppt课件.ppt

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1、菊花的组织培养外植体细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞原理：植物细胞有全能性①②③微生物培养基以有机营养为主。MS培养基则需提供大量无机营养（无机盐），同时还加入植物激素提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压④生根、生芽制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培实验具体操作过程移栽实验具体操作过程（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备。1、配置各种母液①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机

2、物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量实验具体操作过程2、配置培养基①定容②调PH③培养基的分装实验具体操作过程实验具体操作过程3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。注意：①温度为121℃时，维持15-20分钟。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。②某些生长调节剂如赤霉素等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行过滤灭菌。实验具体操作过程1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒考虑的因素说明外植体的年

3、龄选择幼嫩的组织或器官作为外植体外植体的大小选择大小适中的作为外植体外植体所在部位选择芽尖、根尖或幼嫩的茎作为外植体外植体外观形态选择表面相对光滑易消毒的作为外植体2、表面消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右②酒精处理—无菌水冲洗用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗③氯化汞（升汞）—无菌水冲洗取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后

4、在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液实验具体操作过程流水冲洗实验具体操作过程实验具体操作过程（三）接种1、接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线照射20分钟。2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。实验具体操作过程插入时应注意方向，不要倒插，茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。3、材料的切取和接种实验具体操作过程进行外植体的接种接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍，打开紫外

5、灯照射20分钟。工作台消毒后，首先点燃酒精灯。酒精摇动倾倒酒精无菌水冲洗升汞消毒倾倒升汞无菌水冲洗特别提醒：接种过程必须始终在酒精灯旁进行，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，操作过程中避免双手从培养皿上方移动。特别提醒：每瓶内接种材料不宜过多（建议4-5个），彼此之间留出一定空间，从而避免互相污染。思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。实验具体操作过程实验具体操

6、作过程（四）培养无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照接种后的锥形瓶放在培养箱或培养室中培养。培养条件：18-22℃，每日光照12小时。实验结果5-7天，外植体膨胀、生长，颜色变浅，若出现染菌，及时转瓶。实验结果2-3周，愈伤组织开始形成。染菌5-7天后染菌1-2周后实验结果3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。实验具体操作过程（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1、打开封口膜2、清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间实验具体操作过程珍珠

7、岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培。蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。蛭石的化学式为（Mg，Ca）0.7（Mg，Fe，Al）6.0[（Al，Si）8.0]（OH4.8H2O）。实验具体操作过程（六）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花幼苗的移栽和栽培无菌条件如何保证？需要保

8、证无菌条件步骤关键操作培养基及实验器材的灭菌高压蒸汽灭菌灭菌干燥后直接拿到无菌操作台中外植体的消毒酒精、升汞、无菌水彻底清洗接种的无菌操作始终在酒精灯旁进行每次使用器械后，都需要浸泡在95%的酒精中每次使用器械前，都需要用火焰灼烧灭菌