猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及盐城地区流行病学调查.pdf

《猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及盐城地区流行病学调查.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、＇■：’Ｖ．＾ｒ．：：．：簿．．Ｖ辦ｒ记：Ｈｖ；：；．肾＼；＇幸游綠，３Ｍ戶；．．：＼■＂■游．＼／；六璋經：ｉ聲事：着：；潔：担‘育：？？‘－．ｒｒ．，Ｊ扁遂穀Ｍ斬巧．，、／－．＇’５．＜．孩／Ｖ＇Ｘ心ｒ載１一養。户．寺‘＇．．巧．讀；？彭嚷。戶ｒ：、餐爷Ｈ－：．如．．、課－；－，＾气育、－！：私，秦‘．：Ｖ‘培．餐ｉ＊、嗦；．嘶．’皆ｆ每＾去．．＼？？，＜為沁一７＾二ｒ，Ｊ裏＾學＇皆：縣Ｉ‘種、己‘．苗＂Ｃ喪、／帮‘斗＿．石？ｄ学Ｃ［沦女ｆ

2、ｃ？＇ＳＩ．Ｖ＾挺．Ｌ沒？－：．．－＇籍戊型肝枚如病封光定量松齡说＾ｆ丈、．及Ｉ地呕＾制是师查；．：Ｖ；．，，＇４．‘：；．，＿．、．Ａｒ麵气、．社？則气：＾．．；’‘‘．讀＇禱．．為．－Ｖ、－＾咬研巧闻蕾．‘＇：巧．．ｒ一；：ｆ．義皱—．，另！；招指导教瞧私宝浦，‘．Ｖ苗’巧学科专％－生物化５巧纖学：—．、每．护知．．皆‘ｌ；研究方分子ｉ式．；’萬？、＾：培生＊养学命科Ｓ淵完矜、一．＂：．，Ｖ？：＇ｆＶ．Ａ／

3、ｙＡ：．嗎＾畜：．．£：．．■．ｖ：５巧：遠Ｊ碱．－．！马气．．；－＇ｖ．．．．．一ｙ：：：ｖ＾７？，讀為ｆ庚．３叫．￥扛讀．韦．簿Ｈ２ｍＳ邏—．芭轉＂．？、１．，＂畔．／ｒ．，．－績繫斗ｉ、．手‘和兴声拳’．、片．項：ｓＶ；．马參鳴；．叫ｉ譯＜；＾％－隹Universitycode：10223Classifiedcode：Q5Graduatenumber：XS139025Confidentialdegree：

4、PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationEstablishmentoffluorescentquantitativePCRassayforswinehepatitisEvirusandmolecularepidemiologyinYanchengregionPostgraduate：YanLeiSupervisor：ProfessorChenZhi-baoBiochemistryandMolecularMajor：Biolo

5、gyResearchdirection：MolecularbiologyDegreecategory：MasterofscienceDaqingChinaJune,2016摘要戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus，HEV）感染引发的一种急性的病毒性传染病。HEV主要在发展中国家流行，在发达国家呈散发性流行，在我国感染率较高。市场上用于治疗戊型肝炎的药物很少，现在对于HEV的防治，主要以预防及切断传播途径为主。1.为建立猪戊型肝炎病毒（SwineHepatitisEvirus，SHEV）的

6、TaqMan荧光定量PCR检测方法，本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针，并对PCR反应条件进行优化。结果表明，该方法相关系数可达0.999，102拷贝/μL~109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病毒的RNA或DNA进行检测，结果均为阴性。该方法可检出最低拷贝数为101拷贝/μL。重复性试验结果表明该方法的批内和批间变异系数均小于等于3.0%。本研究使用荧光定量PCR对黑龙江省临床收集的131份样品（肝脏45份、粪便86份）进行检测，

7、总阳性率为11.45%，其中肝脏阳性率为22.22%，粪便阳性率为5.81%。该方法的建立为SHEV的快速检出及绝对定量奠定了良好的基础。2.为了解盐城地区猪群感染SHEV的情况，在江苏省盐城地区10家猪场采集了747份猪粪便样品进行检测。采用套式RT-PCR的方法对目的片段进行扩增，通过测序及比对分析。研究结果表明，10家猪场均存在SHEV感染，感染率因猪场及生长阶段而异，感染率分布在2%~28%。试验共检出阳性样品86份，可测序样品81份。对测序结果进行比对分析，构建系统进化树，进行同源进化分析。系统进

8、化分析结果表明，有73份为SHEV基因Ⅳ型，8份属于SHEV基因Ⅲ型。关键词：猪戊型肝炎病毒，荧光定量PCR，TaqMan探针，流行病学IAbstractHepatitisEcausedbyHepatitisEvirus(HEV)isanacuteviralinfectiousdisease.HEVismainlyprevalentindevelopingcountries,sporadicprevalentin