鸡西地区猪戊型肝炎病毒的检测及序列分析-论文.pdf

《鸡西地区猪戊型肝炎病毒的检测及序列分析-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、HusbandryAnima1M。dern业殖养禽畜组稿W~maihnmgxmy2008@sina．corn蔫蘸壤纛梭縻撬曲立春黑龙江工业学院158100摘要：本文探讨鸡西地区猪戊型肝炎病毒检(3)猪戊型肝炎病毒检测及序列分析方法：使测结果及分析其序列特征．为确定本地区猪戊型用PBS将粪便样本配制获得10％悬浮液，经3次反肝炎病毒基因型提供可靠依据。方法：在鸡西地区复冻融后以40℃状态下经8000r／rain离心10min，采集600份猪粪便样本作为本次研究对象．经取上清液利用TrlzolReagent按照相关说明书操PC1K后检测HEV—RNA阳性率及分析序列，记录作，经9．5uLDEPC

2、处理后提取RNA实施反转录。结果并给予统计学分析后得出结论。结果：600份反转录过程应在冰上操作，反应体系共20uL，组成猪粪便样本中106份经检测为HEV—RNA阳性成分包括9．5uL病毒RNA；luL反转录引物R／O；(阳性率17．67％)，494份阴性(阴性率82．33％)，阳4uL、5xM—MLVBuffer；1uL、200U／uLM—MLV；性样本序列与基因Iv型相似度最高，对比结果具0．5uL、40U／uLRNaseinhibitor：4ul2．5mmol／L有统计学意义(P<0．05)。结论：养殖工作者及防疫eachdNTPs。上述成分混合均匀后于40C水浴lh工作者应提高警惕

3、．将预防及干预猪戊型肝炎病后在冰上作用2min直接PCR或保存于一400C条毒感染作为工作重点．采取多种有效措施降低猪件下待用。PCR反应体系l(20uL)：2uL、10xM—感染戊型肝炎病毒的几率，阻断人畜共患疾病传MLVBuffer；2uLdNTP；0．25uL、5U／ulLExTaq播途径．保障人们饮食健康。酶；2ulDNA模板；0．5uL、20pmol／LM1；0．5uL、关键词：猪；戊型肝炎病毒；检测；序列20pmol／LM2；13ulddH2O，PPCR反应体系2本文将探讨鸡西地区猪戊型肝炎病毒检测结(50uL)：0．5uL、5U／uLExTaq酶；luL、20pmol／L果及分

4、析其序列特征，为确定本地区猪戊型肝炎病M3；luL、20pmol／LM4；4uL、10xM—MLVBuffer；毒基因型提供可靠依据。现报告如下。4uLdNTP；35．5ulddH2O；4uLPCR反应体系l产1资料与方法物。两轮PCR于相同条件下反应，即940C条件下1．1一般资料预变性5min，之后于940C变性lmin，530C条件下在鸡西地区60个猪场采集猪粪便样本，每个退火45s，720C延伸lmin，共实施35个循环，最后猪场采集l0头猪，共600份猪粪便样本作为本次一个循环结束后经720C、10min延伸。将5uL第二研究对象，经冷冻后送回实验室。轮PCR产物实施琼脂糖凝胶电泳

5、(将l％琼脂糖凝1．2方法胶加入0．5ug／mL溴化乙锭中)，于紫外检测仪下观(1)试剂：华南农业大学兽医学院禽病教研室察HEV—RNA检测阳性率，并利用DNAStar、提供DH5a大肠杆菌：TaKaRa公司提供DL一2000MEGA4．1生物学软件对所得扩增片段进行序列分DNAMarker、RNaseinhibitor、dNTPs、random析确定基因型。primersP(N)6、pMD18一Tvector、M一ⅣILV、Olig1．3统计学方法(dT)18、ExTaq酶；Invitrogen公司提供Trlzol使用SPSS13．0软件包对数据进行统计学分Reagent；TIANGEN公

6、司提供琼脂糖凝胶DNA回析，计量资料采用t检验(由±s表示)，计数资料采收试剂盒；其他试剂(异丙醇、氯仿等)均为分析纯。用X检验，以P<0．05为差异有统计学意义。(2)合成引物：在全基因序列的5725～6452nt片2结果段上涉及引物(扩增片段348bp)并由上海英骏公司600份猪粪便样本中106份经检测为HEV—合成(5725～6452nt片段)：㈠外引物；㈡内引物。RNA阳性(阳性率17．67％)，494份阴性(阴性率麟2014。08畜禽养殖业ModernAnimalHusbandry组稿＼Emaihmngxmy2008@sina．colll梅灵王萨仁图雅内蒙古扎兰屯农牧学校16265

7、0随着奶牛养殖业的迅速发展，为了提高奶牛的胃中革兰氏阴性菌剧烈的动态变化。浓度高的LPS生产性能。部分养殖者在泌乳早期和中期大量饲喂从胃肠道转运到体内可刺激促炎性细胞因子的产以易发酵的碳水化合物为主要能量来源的高精饲生，从而刺激肝细胞分泌急性期蛋白，引起急性期料和酸性饲草饲料，而这些饲料，可引起高产奶牛反应。这时奶牛会发生全身性炎症，血浆微量元素的一系列营养代谢疾病．其中最常见的是瘤胃亚急和代谢产物受到干扰。