鸡西地区戊型肝炎流行病学研究.pdf

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1、试验研究鸡西地区戊型肝炎流行病学研究曲立春(黑龙江工业学院，牡丹江157000)摘要：目的：探讨鸡西地区戊型肝炎流行病学特征。方法：对600份猪血清样本采用双抗原夹心法检测HEV—DNA．记录检测结果阳性率，给予统计学分析后得出结论。结果：600份猪血清中116份HEV—RNA检测结果为阳性(阳性率19．33％)，检测结果与年龄、品种相关性对比分析可知，年龄与检测结果阳性率呈正相关，而约克夏品种检测结果阳性率最高(100．00％)，对比结果具有统计学意义(P<0．05)。结论：养殖者及防疫工作者应准确掌握本地区猪戊型肝炎病毒流行病学特征，对戊型肝炎高危猪群应采取适当药物干预措施并积极改善饲养

2、环境，降低猪戊型肝炎发生率，提高人民饮食安全性。关键词：猪；戊型肝炎；流行病学DO1：10．3969／J．ISSN．1671—6027．2014．08．016本文将于2013年1月1日至2013年12月31日期间物P—out2)于42℃恒温环境下逆转录60min，PCR反应体系选取600份猪血清样本进行本次研究，探讨鸡西地区戊型肝(25L)组成成分为0．5L、lOmmol／LdNTP混合物；0．5L炎流行病学特征，从而为防疫工作者提供可靠依据，降低戊Taq酶；16IXL灭菌水；2．5mL反转录产物模板；2．5L、10X型肝炎发生率及保障人类生活质量，现结果如下。PCR缓冲液；P—out1／P

3、—out2或P—in1／P—in2引物各1资料与方法0．5L，首轮PCR反应于95℃预变性3rain后，94~C条件下1．1一般费料共采集鸡西地区养殖场猪前腔静脉血清样变性Imin并退火lmin(53℃)、延伸lmin(72cc)，共35个循本600份(5—10mL)，年龄19d—In，平均年龄(4．89±1．83)个环，最后循环应72℃延伸10min；再次PCR实施30个循环，月，品种分布：大约克夏(LargeYorkshire)109份、长白(Lan—条件同首轮PCR。经琼脂糖凝胶电泳后于成像仪保存图像，drace)256份、杜洛克(Duroc)194份、约克夏(Yorkshire)41

4、经Cutof值对检测结果进行分析，其中COV值为D4~nm+0．22份。(阳性对照D4~nm1．0，阴性对照D45onm<~0．05)，若所得结果1．2方法D4sonm值不小于COV值则判断为阳性，反之为阴性。1．2．1试剂上海生物工程公司提供10mmol／LTrizol及1．3统计学方法使用SPSS13．0软件包对数据进行统计学10mmoVLdNTP；Promega公司提供200U／L反转录酶分析，计量资料采用t检验(由±s表示)，计数资料采用X2M—MuLVReversTranseriptase；MBI公司提供5U／LTaq检验，以P<0．05为差异有统计学意义。DNApolymeras

5、e；TaKaRa公司提供40U／txLRNAsin；北京贝2结果尔生物工程有限公司提供HEV抗体酶联免疫试剂盒(双抗600份猪血清中116份HEV—RNA检测结果为阳性(阳原夹心法)。性率19．33％)，检测结果与年龄、品种相关性对比分析可知，1．2．2HEV—RNA检测以ORF2为扩增目片段，长度年龄与检测结果阳性率呈正相关，而约克夏品种检测结果阳617bp，由上海生物工程公司合成两对引物：①外引物(out)：性率最高(100．00％)，对比结果具有统计学意义(P

6、3’；②内弓I物(in)：P1：5’一GTGGCGTFCACTI'GA—表1600份猪血清中HEV—RNA流行病学分析(例％)GAC一3’、5’一GCAACACCCTFATCGCGT一3’。将血清样本置入恒温箱(370)中培养lh后经每分钟3000r；离心lOmin，分离血清(上清液)后于一200C保存待用，根据HEV抗体酶联免疫试剂盒相关说明，应用双抗原夹心法检测血清中HEV抗体(若样本为猪粪或猪肝脏则应采用Trizol法提取病毒RNA)。26L反转录一聚合酶链式反应体系组(2L、10mmol／LdNTP混合物；16LRNA模板；0．5L、40U／LRNAsin；5L、5×Bufer缓冲液

7、；1txL、25mmol／L反转录引注：△表示与1个月<阳性率所占比例对比结果具有统基金项目：黑龙江省教育厅高职高专院校科学技术研究项目计学意义(P