日本血吸虫exosomes调控虫体与宿主互作的功能研究.pdf

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1、．，１分类号密级．．’ＵＤＣ编号．中国农业科学院乂博去后研究工作报告日本血吸虫ｅｘｏｓｏｍｅｓ调控虫体与宿主互作的功化研巧朱雨慧ｒ．．ｒ’＇工￣作完成。期２０１４年７月２０１６年Ｈ月．，’■１，？Ｌ．！＇报告提交日期２０１６年１１月■■—Ｉ■，．，＊．？■．．．，－’－－．‘．－；：？，、—．一中国农业科学巧２０１６年ｎ月日本血吸虫

2、灼［ｏｓｏｍｅｓ调擅虫体与宿主互作的功能研究ｉｉｆ－Ｓｔｕｄｅｓｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｓｍｓｏａｒａｓｉｔｅｈｏｓｔｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｐｅｘｏｓｏｍｅｓｓｅｃｒｅｔｅｄｂ义ｏ灼ｋｗｗｙｙ咕博去含姓名朱丽慧一级学科流动站（）若称兽医学专业（二级学科）名称预防兽医学研究工作起始时间２０１４年７月Ｉ日研《工作期满时间２０１６年ｎ月２８日中国农业科学院上海兽医研《所人事处２０１６年ｎ月独创性声明本人声明所呈交的论

3、文是我个人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果，，论。尽我所知除了文中特别加标注和致谢的地方外文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。义／博±后签名：时间；如年月曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，

4、可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。／博±后签名：时间：备年义月曰合作导师签名：时间：年月曰内容痛要日本血吸虫病人兽共患，危害严重。然而，目前有关血吸虫与宿主互作的机制认识仍非常有限。大量研究显示，分泌型的外泌体（ｅｘｏｓｏｍｅｓ）在病原体与宿主互作中发挥重要的调控作用＾乂日本血吸虫ｅｘｏｓｏｍｅｓ的调控功能。为此，本研究研究为切入点，分南并鉴定日本血吸虫ｅｘｏｓｏ

5、ｍｅｓ中的组份，研究虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ在细胞中迁移情况和作用效应细胞和免瘦细胞的一，特别是对宿主肝脏影响，进步鉴定虫源性ｅｘｏｓｏｍａｌｍｉＲＮＡｓ对宿主及虫体把向基因的调控机制。预期研究结果将从ｅｘｏｓｏｍｅｓ视角揭示日本血吸虫与宿主互作的寄生调控机制，为探讨血吸虫病的防治手段提供新思路。１．日本血吸虫ｅｘｏｓｏｍｅｓ分离和鉴定＇结合透析、超滤、超速离心和商用抽提试剂盒，筛选日本血吸虫ｅｘｏｓｏｍｅｓ的分离和纯化方法利用选射电镜观察ｅｘｏｓｏｍｅｓ的形态运用质谱、测序

6、ｋ乂及生；；物信息学技术研究ｅｘｏｓｏｍｅｓ中的蛋白和ＲＮＡ组份，分析组份的潜在功能。结果显示分离出的日本血吸虫ｅｘｏｓｏｍｅｓ直径大小在５０－１００ｎｍ。巧谱结果共鉴定出４０３个蛋白，这些蛋白主要参与结合、惟化、翻译调节等过程。ＳｍａｌｌＲＮＡ测序鉴定出ｏ民ＮＡ－了５ｉｓｃ山ｏｆｒｅａｄｓ＞１００另有约ｌ２８４６６ｒｅａｄｓ３．４／ｏ１个已知的虫源性ｍ（），，ク（，一２，５４０个ｕｎｉｑｕｅｓｍａｌｌＲＮＡｓ能与宿主基因组匹配，其中包括个宿主源性的）－－ｍ１９１－５４５４

7、８日本血吸虫既包括虫源性ｉＲＮＡｏｃｕｍｉ民ｒｅａｄｓ，表明ｅｘｏｓｏｍｅｓ中ｐ（，）的遗传信息也包含宿主源性的信息，其可能参与虫体发育及血硬虫致病过程。２．虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ调控宿主肝脏功能体夕ｈ，将虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ与肝细胞共轉育，利用巧光素标记虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ采用茨光显微技术观察虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ的迁移情化ＲＴ－ＰＣＲ技表膜蛋白：运用，ｑ术研究共膊育后的宿主肝细胞中虫巧性的ｅｘｏｓｏｍａｌｍｉＲＮＡｓ的表达情况，鉴定虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ能否传递虫源性

8、信息到宿主肝细胞中。结果发现，共膊育后，虫源性ｍｉ民ＮＡ可Ｗ在宿主细胞中检测到，其潜在宿主把基因表达下调，表明日本血哎虫６乂〇８〇１１１６５可＾被宿主肝细胞巧？化，且将虫巧性的ｍｉ民ＮＡｓ传递到肝脏细胞，调控宿主肝细胞化基因的表达。３．虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ介导的免疫调控效应将虫源性ｅｘｏｓｏｍｅｓ与巨堆细胞共膊育，茨光分别标记虫巧性ｅｘｏｓｏｍａｌ蛋白和ＲＮＡ，巧光显微镜观察ｅｘｏｓｏｍａｌ蛋白和ＲＮＡ在巨嗦细胞中