中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：紐日期：1〇1讲〇明〇m学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致

2、。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国I术期刊（先盘版）电子杂志社送父本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：苏IfB期：糾料与幼_'V导师签名：日期；1〇丨5耳1f玛8日中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系中文摘要中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系中文摘要目的：血吸虫病是一种流行广

3、泛、严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病，而我国属于血吸虫病流行最严重国家之一。我国血吸虫病的流行现主要局限于水位难以控制的湖沼地区和山区。血吸虫因生态环境（如终宿主）不同或选择压力（如化疗）而形成相应的血吸虫亚群或株，而其传播流行可通过群体遗传学方法进行分析。群体遗传学方法在血吸虫上已有广泛研究，然而多侧重于地区间或终宿主间的群体遗传结构分析，而有关中间宿主体内和中间宿主间血吸虫个体间的遗传关系较少。因此，本研究以前期研究的山区型血吸虫病流行区为现场，通过现场调查感染性钉螺，室内逸出尾蚴感染小鼠收集虫体，利用微卫星位点对虫体进行基因分型，进而分析血吸虫群体遗传多

4、样性及钉螺内和钉螺间血吸虫的亲缘关系，有助于深入了解血吸虫的传播特征，为建立血吸虫病传播动力学数学模型提供参数，同时为有效地控制血吸虫病流行提供新思路。方法：从已发表文章中选择17对多态性较好、适用于本研究的微卫星引物，对这些引物进行同一体系和PCR反应条件扩增，对扩增不好的引物进行温度梯度PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖电泳检测，确定各自最佳退火温度。舍弃扩增不好的引物，运用余下引物对3只钉螺的41份血吸虫样本进行PCR扩增、琼脂糖电泳检测、检测片段大小，将结果整理成基因型数据。基于血吸虫个体基因型，检测每对引物是否能将来自不同钉螺的血吸虫个体鉴别开。舍弃鉴别

5、失败的引物，最终确定用于研究血吸虫遗传关系的微卫星引物。将从血吸虫病流行现场（安徽石台地区）采集到的钉螺带回实验室进行逸蚴实验，鉴别阳性钉螺。将阳性钉螺逸出的尾蚴感染小鼠，收集血吸虫成虫。运用最终确定的微卫星位点对血吸虫成虫进行基因分型。对血吸虫基因型数据进行统计分析前，利用GENECAP1.2.2剔除钉螺内相同基因型的血吸虫。接着利用FSTAT2.9.3进行群体遗传多样性分析，包括各位点等位基因数目、等位基因频率、有效等位基因数目、观察杂合度(Ho)、期望杂合度(He)和近I中文摘要中间宿主钉螺和钉螺间日本血吸虫的遗传关系交系数(Fis)及其标准差，各位点的多

6、态信息含量(PIC)釆用相关公式计算；对各位点利用GENEPOP4.0进行哈迪-温伯格平衡检验；对钉螺间血吸虫基因型分布进行Poisson2分布拟合优度检验（x检验）。利用SPAGeDi1.3软件计算钉螺内和钉螺间日本血吸虫亲缘关系系数；利用Colony2.0进行胞系分析，推断钉螺内和钉螺间日本血吸虫的胞系关系。结果：1.现场采集8563只钉螺，筛选得到67只阳性钉螺。阳性钉螺经逸蚴实验，最终成功感染46只小鼠，收集到472条血吸虫成虫。经过引物筛选和条件优化，最终确定12对微卫星引物。12个微卫星位点的等位基因数从4到25个不等，平均每个位点上含有16.7个等

7、位基因。有效等位基因数的范围为1.103-1.922。12个微卫星位点的观测杂合度范围为0.005-0.914，平均为0.633；而期望杂合度的范围为0.057-0.557，平均为0.437；多态信息含量的范围为0.1-0.914，平均为0.743，除sjp4和sjp22之外，其余10个位点多态信息含量均大于0.5。本研究初步认为筛选出的12对微卫星标记适用于日本血吸虫，可以作为其遗传学研究的良好标记。2.12个微卫星位点近交系数（Fis）的范围为-0.709-0.779，平均值为-0.365，表明：sjp22位点杂合子缺失（Fis>0），其余11个位点均表现为

8、杂合子过剩(Fis<0)