十二指肠贾第虫端粒酶互作蛋白RFC1在虫体内的定位与功能研究

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1、分类号：S852.72单位代码：10183研究生学号：2015852019密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）十二指肠贾第虫端粒酶互作蛋白RFC1在虫体内的定位与功能研究StudyontheLocalizationandFunctionofTelomeraseInteractionProteinRFC1inGiardiaduodenalis作者姓名：李显赫专业：预防兽医学研究方向：兽医寄生虫与寄生虫病学指导教师：张西臣教授培养单位：动物医学学院2018年6月十二指肠贾第虫端粒酶互作蛋白RFC1在虫体内的定位与功能研究StudyontheLocalizatio

2、nandFunctionofTelomeraseInteractionProteinRFC1inGiardiaduodenalis作者姓名：李显赫专业名称：预防兽医学指导教师：张西臣教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月6日本研究受国家自然科学基金资助(Nos.31672288,30970322)ThisstudywassupportedbyNationalNutureScienceFoundationofChina(Nos.31672288,30970322)未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文

3、的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士(或硕士)学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学

4、位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。论文级别：■硕士□博士学科专业：预防兽医学论文题目：十二指肠贾第虫端粒酶互作蛋白RFC1在虫体内的定位与功能研究作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林省长春市西安大路5333号作者联系电话：15943007060中文摘要十二指肠贾第虫端粒酶互作蛋白RFC1在虫体

5、内的定位与功能研究十二指肠贾第虫（又称为蓝氏贾第虫，肠道贾第虫）是一种具有双核的单细胞真核厌氧微生物，通常在全球范围内引起腹泻疾病。十二指肠贾第虫分布广泛，十二指肠贾第虫病在世界范围内流行或暴发流行，是十种主要危害人类健康的寄生虫病之一。十二指肠贾第虫最常见的传播方式为水源传播，常在在旅行者中爆发，故被称为“旅行者腹泻”。十二指肠贾第虫能够感染人和多数哺乳动物，故国际上认定为该病为重要的人兽共患寄生虫病。十二指肠贾第虫虫体内结构简单，只有非常简单的内膜系统以及特殊的双细胞核结构，够实现“永生化”的体外纯培养及传代，属于早期真核生物，在生物进化史中具有重要地位，是理

6、想的“模式生物”。细胞永生化是当前细胞生物学研究的热点之一。目前研究认为细胞永生化与端粒密切相关，端粒（Telomere）是一种特殊核蛋白复合体，能够稳定染色体结构。随着对端粒和端粒酶研究的深入，发现一些端粒酶相关蛋白质在对端粒酶活性调节方面具有重要作用。十二指肠贾第虫滋养体的双核大小形态都很相似，已有研究表明二者DNA含量相同，在复制、转录、有丝分裂等生命活动中时同步的。但这仍不能说明两细胞核是完全相同的，比如是否均存在端粒酶及其活性调节机制尚不清楚。在本实验室前期研究中，通过酵母双杂交筛选系统发现十二指肠贾第虫复制因子C-亚基1（RFC1）能够与端粒酶在体外互

7、作，并通过体外蛋白互作技术得到验证。故本实验进一步探讨RFC1和端粒酶体内互作验证和RFC1对端粒酶活性的调节作用研究，为深入阐释十二指肠贾第虫端粒酶活性调节机制，细胞周期调控或生存策略提供实验支撑。RFC1和端粒酶在细胞内的互作：通过修改双分子荧光互补系统，构建重组质粒pbTRBD-HA-KN151和pbRFC1-Myc-LC151，并将其电击转染进入293T细胞，经过24h培养后，激光共聚焦显微镜观察到在293T细胞细胞核内产生红色荧光，这说明RFC1和端粒酶能够在细胞内发生互作。IRFC1和端粒酶在十二指肠贾第虫内的互作定位：通过制备兔源RFC1和鼠源端粒酶

8、多克隆抗体