日本血吸虫体被蛋白sjrad23和sjmblac1的初步研究

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1、学校代码：10270学号：112200916上骖脚范大孑硕士学位论文论文题目日本血吸虫体被蛋白SjRAD23和SjMBLACl的初步研究学院生命与环境科学学院专业动物学研究方向动物生物技术研究生姓名李长健指导教师林矫矫完成日期2014年4月SchoolCode：10270StudentNumber：112200916ShanghaiNormalUniversityMasterThesisAPreliminaryStudyonSiRAD23andSjMBLAC1fromSch妇纫sD聊口1r●JapontcumDepartmentCollegeofLifeandEnvironme

2、ntScienceMajorZoologySpecialtyZoologicalbiotechnologyNameAdvisorChang-jianLiJiao-jiaoLinDateApril，2014上海师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：矿件年6月3日上海师范大学学位论文版权使用授

3、权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于校内导师签名：论文作者签名：保密口，在——年解密后适用本版权书。不保密口。校外导师签名：沙‘怍妇>日上海师范大学硕上学位论文中文摘要摘要日本血吸虫病是由日本血吸虫(SohYstosomejapo疗icum)感染所引起的一种严重危害人畜健康的寄生虫病，当前，该病流行于我国南方7省，给疫区人民和动物的

4、健康造成严重威胁。目前还没有有效的血吸虫病疫苗，毗喹酮是唯一大规模使用的治疗药物，筛选疫苗候选分子和新的药物靶标是血吸虫病防治研究的迫切需求。诊断在血吸虫病防治过程中具有重要的作用，而现有的日本血吸虫病诊断方法不能满足诊断需求，因此寻求～种更为敏感、特异，并且具有疗效考核价值的诊断方法也是当前的十分迫切。日本血吸虫的体被是其与宿主相互作用的主要界面，在日本血吸虫的生长发育中具有重要的作用，一些分布于体被上的表膜蛋白是重要的疫苗药物靶标和诊断抗原分子。前期本实验室应用蛋白组学技术系统分析了不同发育时期日本血吸虫体被表膜蛋白，筛选出SjRAD23和SjMBLACI两个表膜蛋白，推测

5、它们在血吸虫寄生生活中可能起着重要作用。为探讨这两个基因的生物学功能，评估其作为疫苗候选分子的潜力以及诊断抗原的价值，本文开展了以下研究。1日本血吸虫RAD23基因的克隆表达、特征分析及小鼠免疫保护效果评估辐射敏感蛋白23具有核苷酸切除修复功能，在泛素蛋白酶体途径中起到重要作用，是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白。本研究利用PCR技术克隆日本血吸虫辐射敏感蛋白23(SjRAD23)编码的cDNA序列，其ORF为1053bp。构建了SjRAD23基因重组表达质粒pET28a(+)-SjRAD23，并在大肠杆菌BL2l中成功诱导表达，重组蛋白分子量大约44kDa，在上清和沉淀中均，

6、{一上海师范大学硕士学位论文中文摘要有表达。利用免疫组化技术观察该蛋白广泛分布在日本血吸虫虫体被膜。用重组蛋白免疫BALB／C小鼠后，免疫小鼠血清中检测到较高水平的196、IgGl和1962a特异性抗体。Westernblotting分析结果显示重组蛋白能够被日本血吸虫成虫可溶性抗原免疫小鼠血清所识别，表明具有良好的免疫原性。应用重组蛋白rSjRAD23结合佐剂206免疫小鼠与206佐剂对照组比较获得了35．94％减虫率和40．59％肝脏减卵率，说明rSjRAD23在BALB／c小鼠中诱导产生了部分的免疫保护效果。2日本血吸虫MBLACl基因的克隆表达、特征分析及小鼠免疫保护效

7、果评估金属B一内酰胺酶(MRL)是一种依赖锌离子的存在而发挥催化活性的酶，其底物涵盖碳青霉烯类等在内的多种B一内酰胺类抗生素。本研究利用PCR技术克隆日本血吸虫金属一B一内酰胺酶结构域蛋白1(MBLACl)编码的cDNA序列，其ORF为7llbp。构建了SjMBLACl基因重组表达质粒pET28a(+)一SjMBLACl，并在大肠杆菌BL2l中成功诱导表达，重组蛋白分子量大约33kDa，在上清和沉淀中均有表达。利用免疫组化技术观察表明该蛋白广泛分布在日本血吸虫虫体被膜。用重组蛋白免疫BALB