日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体mirna表达分析

《日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体mirna表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体miRNA表达分析AnalysisonmiRNAexpressionofhostandschistosomulumamongdifferentsuitablerodentanimalsunderSchistosomajaponicum●■■-●InIection博士生：韩宏晓导师：陶建平教授林矫矫研究员专业：预防兽医学资助项目：公益性行业(农业)科研专项200903036国家重点基础研究发展计划项目(973计划)2007CB513108国家自然科学基金31172315，812

2、71871江苏省普通高校研究生科研创新计划CXZZll0993扬州大学2013年4月韩宏晓：日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体miRNA表达分析1日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体miRNA表达分析中文摘要血吸虫病是由血吸虫感染引起的危害严重的人畜共患寄生虫病，在我国流行的是日本血吸虫病，目前仍是我国最重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫可感染40多种哺乳动物宿主，不同宿主对血吸虫感染的适宜性存在较大的差别。山羊、黄牛、绵羊、兔子和小鼠等都是其适宜宿主，血吸虫的发育率可达50％～70％，而在大鼠、水

3、牛等非适宜宿主体内血吸虫的发育率仅为10％左右，东方田鼠是至今发现的唯一一种感染血吸虫后不致病的哺乳动物，血吸虫感染东方田鼠后，虫体发育迟缓，大部分虫体在感染后15天死亡，不能发育成熟。不同的宿主有着独特的机体内环境，会影响日本血吸虫的生长发育、雌雄合抱和虫卵形成，最终影响虫体在宿主体内的存活状态及宿主的病理变化。miRNA是一种内源性的非编码小RNA分子，研究发现其在多个生物学过程如生长发育、凋亡、增殖、细胞分化、能量代谢、免疫调控及肿瘤发生等发挥重要的作用。本研究利用Solexa高通量测序技术，对不同适宜性啮齿类宿主

4、来源的童虫进行miRNA的鉴定及分析，对与miRNA调节息息相关的血吸虫凋亡通路及凋亡相关基因作了分析；利用miRNA芯片比较、分析小鼠、大鼠和东方田鼠三种不同适宜性宿主感染日本血吸虫前后miRNA的表达谱变化。本研究可加深理解miRNA在血吸虫的生长发育、与宿主相互作用等生物学过程中发挥的调节作用提供理论基础，也可为筛选血吸虫的早期诊断分子标记、疫苗候选分子和新治疗药物靶标提供新的思路和新途径。一、不同适宜性啮齿类宿主来源日本血吸虫童虫miRNA的初步鉴定及血吸虫凋亡研究用Solexa深度测序法对小鼠、大鼠和东方田鼠来

5、源的日本血吸虫童虫进行测序，结果一共得到35585878条高质量的reads，其中有效的reads共有28088302条。进一步的生物信息学分析表明，小鼠来源的童虫中有131个miRNA，大鼠来源的童虫中有100个，东方田鼠来源童虫有144个，其中有32个miRNA在三种宿主来源童虫中均有表达，并对已知的28个日本血吸虫miRNA分子进行聚类和差异表达分析。本研究共鉴定出50个新miRNA分子，其中保守的有34条，日本血吸虫特有的有16条。这些miRNA分子的发现对研究日本血吸虫在不同宿主体内的生长发育、凋亡、营养代谢及

6、相互作用提供了有价值信息，为后续深入研究miRNA分子在血吸虫基因表达调控中的可能作用机制提供了理论依据。本课题组前期研究表明凋亡是促使日本血吸虫在东方田鼠体内消亡的主要原因之一，研究中对不同宿主来源童虫的miRNA进行分析时也发现部分差异表达的miRNA可能与凋亡调控相关。本研究使用凋亡常用的检测方法TUNEL(terminaldeoxynucleofidyl扬州大学博士论文transferase-mediateddUTPnick-endlabeling)和DAPI双染法，定性分析日本血吸虫14天童虫虫体细胞凋亡现象。

7、应用AnnexinV-FITC／propidiumiodide(PI)(AnnexinV／PI)技术定量分析14天和23天日本血吸虫虫体细胞的凋亡比例，采用商业化哺乳动物凋亡关键分子CaspaSe3和Caspase7活性检测试剂盒检测日本血吸虫虫体Casp2Lse3和CaspaSe7的活性，结果显示童虫期虫体的活性高于成虫，雄性成虫的活性高于雌性成虫，相应的结果得到qPCR验证。研究发现，广谱的凋亡抑制剂c嬲pasepeptideinhibitor(Z．VAD．FMK)对日本血吸虫虫体的CaSpaSe3／7活性有着很好的

8、抑制作用。通过对不同期别日本血吸虫凋亡相关基因的qPCR分析，进一步明确了日本血吸虫可能存在的凋亡通路。这些结果为深入探析miRNA在血吸虫凋亡中的调节作用，日本血吸虫与宿主的相互作用以及开发抗日本血吸虫新药物奠定了基础。二、日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类宿主后组织miRNA表达谱变化BALB／c小鼠是日本血吸虫的适