2017-18学年高中生物第四部分浅尝现代生物技术实验13DNA片段的PCR扩增学案.doc

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1、第四部分浅尝现代生物技术实验13DNA片段的PCR扩增一、PCR技术1．PCR的全称是：____________。2．PCR技术是用于DNA片段复制、扩增的生化技术。3．PCR技术用途：除用于基因扩增外，还用于____________。4．PCR技术的具体应用：在法学、医学、食品和考古学上也是重要的实用工具，如______鉴定、______鉴定、食品质量的确定、______病诊断、肿瘤病和其他疾病的诊断以及考古中人种的确定等。答案：1.聚合酶链反应3．测定DNA序列4．亲子　犯罪　遗传二、DNA的体内自我复制与PCR技术DNA聚合酶在有________的存在时，利用4种__________

2、__，可从____末端向____末端合成新链。PCR技术还需要____________________作为________________，这一段叫______。答案：DNA模板　脱氧核苷三磷酸　5′　3′　与DNA模板互补的一段单链DNA　聚合酶作用的起点　引物三、PCR作用的过程1．1个循环的操作：步骤具体操作双链DNA____将双链DNA加热至____℃，DNA____，DNA之间的______打开，双链分离(也叫做______)续表步骤具体操作与______结合双链分离后，将温度____________℃，这一降温过程叫______。退火后，引物可与2个____________分别

3、结合DNA新链的____________℃下，聚合酶可利用________组装模板的互补链，从引物延伸至____末端42.一般大约需要重复上述3步骤______个循环。3．结果：一个循环形成____个双链DNA，在20个循环后(大约1h),1个DNA片段可扩增上百万个拷贝，30个循环可产生10亿个拷贝。答案：1.分开　95　变性　氢键　解链　引物　迅速降至40～60　退火　单链的DNA模板　延伸　72　4种dNTP　3′2．15～303．2四、实验操作1．设备、用品(略)2．材料：凝胶、DNA标样、PCR试剂盒、TBE缓冲液、0.1%亚甲蓝3.步骤：　　　　　　　　文字说明：取3个0.5m

4、L微量离心管，分别记做1、2、3号。用取样器按表一加入试剂，关闭上盖并在振荡器上振荡20s，使之混合均匀↓将3个微量离心管放在固定器上，保证每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的时间依次放入3个水浴进行PCR↓将TBE缓冲液加入到电泳槽中，使缓冲液高出凝胶面3~4mm，再将样品加入凝胶板的加样孔中。所加顺序内容依次为：凝胶板中的加样情况说明表加样孔编号（对应右图所示）1234离心管中样品标号SA1A2A3所加样品1号样品20微升DNA标准溶液PCR产物1（72℃1min后得到的）PCR产物2（72℃1min、70℃2min后得到的）对照组产物2号样品2微升蓝色缓冲液1号样品与2

5、号样品必须充分混匀后再加入↓4开始进行电泳，若用18V电池的电泳4～6h；若甲直流电泳仪电源，80V可电泳40min↓电泳后将凝胶缓冲液倒出，缓冲液可再利用。将10mL染色剂（亚甲蓝）覆盖在凝胶表面，15~20min后移去（可再利用），再加入5mL70%乙醇，不断摇动1~2min，使其分布均匀，再除去，加入冷水，几分钟后看到蓝色的区带出现，这就是扩增的DNA↓比较、判断胶片结果图表辅助：表一：试剂1号管(12个循环)2号管(14个循环)3号管(对照)PCR混合液2020—蒸馏水——20引物202020模板DNA101010总体积505050↓表二：时间温度目的42min30s30s1m

6、in2min95℃95℃49℃72℃70℃开始变性(解链)最后扩增↓↓↓胶片染色结果　4