DNA粗提取与提纯.ppt

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1、第四章遗传的分子基础§4.2DNA的提取和鉴定1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。2.尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取及鉴定。3.培养实事求是的科学态度和探索精神。1.DNA粗提取的选材，思路和鉴定原理是什么？2.DNA与蛋白质的性质差异如何？3.破碎动物细胞和植物细胞的方法有何不同？4.根据DNA在NaCl溶液中的溶解度不同如何控制其溶解和析出？5.DNA粗提取和鉴定的步骤是什么？认真阅读教学案,思考以下问题：NaCl1．DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的_____溶液中溶解度不同，利用

2、这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。此外，DNA不溶于_____溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于_____。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。2．蛋白酶能水解_____，但是对_____没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在________才会变性。洗涤剂能够瓦解________，但对DNA没有影响。3．在______条件下，DNA遇______会被染成___色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。酒精酒精蛋白质DNA80oC以上细胞膜沸水

3、浴二苯胺蓝实验思路§4.2DNA的提取和鉴定DNA从哪提取？怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？怎样鉴定我们提取的DNA？【实验原理】1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。3.酸性条件下，DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。2

4、mol/L0.015mol/L【实验材料】1、鸡血细胞液（5~10ml）；2、体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；3、蒸馏水；4、质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸钠溶液；（抗凝剂）5、物质的量浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液；6、二苯胺试剂。【实验过程】制备鸡血细胞液过滤含有DNA的氯化钠溶液提取含杂质较少的DNADNA的鉴定析出含DNA的粘稠物滤取含DNA的黏稠物再溶解DNA的黏稠物提取鸡血细胞的核物质溶解滤液中的DNA课前制备：鸡血细胞液b.鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细

5、胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长3.选择鸡血做实验材料的原因:a.鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得1.实验材料的选取:2.选材：新鲜的猪血新鲜的鸡血原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。（×）（√）→哺乳动物成熟红细　　　　　　　　胞无细胞核，DNA含量极少不易提取4.制备鸡血细胞液过程：取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混

6、合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）5.柠檬酸钠作用：防止血液凝固6.实验时，为什么用吸管除去离心管上部的澄清液？血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞。离心后上清液是血浆（不含有血细胞），除去它就可以得到鸡血细胞液。DNA容易被玻璃容器吸附，所以最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液7.注意事项：步骤1.提取鸡血细胞的细胞核物质

7、将制备好的鸡血细胞液5mL～10mL，注入到50mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL，取其滤液。讨论：（1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？（2）用玻璃棒搅拌有什么意义？（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？分析：答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破（1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？（2）用玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快

8、速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA步骤2.溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为2mol／L的溶液40mL加入到滤液中，