DNA粗提取与鉴定ppt课件.pptx

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1、情景：法医在某重大命案的嫌疑人K的牛仔裤和衬衣上发现了极少量可疑血迹，但需进一步确认该血迹是否来自本案的被害者。。。方案1：分析可疑血迹的血型是否与被害者血型吻合方案2：提取可疑血迹中的DNA，分析DNA是否与被害者的DNA吻合。方案3：严刑拷打！✘✘血液的组成成分血浆（55%）血细胞（45%）人体白细胞有细胞核，能够提取DNA。人体血细胞的组成人体成熟红细胞无核故无法提取DNA血小板没有完整的细胞结构无法提取DNA结论：从凝血中提取DNA理论上可行需要灵敏度较高的提取方法本节课题：能否利用较为简单的提取方法和设备尝试对细胞中DNA进行初步的粗提取？相对易于获取DNA含量相对较

2、高实验材料选取原则：普通洋葱体细胞染色体2N=16四倍体洋葱体细胞染色体4N=32多倍体植物DNA含量更高，有利于提取。染色体数目加倍多倍体草莓野生草莓相对易于获取DNA含量相对较高实验材料的选取原则：下一步应该怎样对实验材料进行处理？思考：DNA在细胞内的存在部位？主要在细胞核少量位于线粒体及叶绿体要提取DNA，应当怎样处理细胞？破坏细胞结构完整性（破坏细胞膜及核膜）洗涤剂的主要成分是具有去垢作用的表面活性剂。这类化学成分可通过破坏脂双层和膜蛋白使生物膜瓦解，将DNA从细胞核内释放出来。洗涤剂瓦解细胞膜的示意图向鸡血中加入一定量的柠檬酸钠以及蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，使鸡血细

3、胞吸水涨破。过滤，并收集滤液思考：DNA在细胞内的存在部位？主要在细胞核少量位于线粒体及叶绿体要提取DNA，应当怎样处理细胞？破坏细胞结构完整性过滤后的滤液中是否即含有较为纯净的DNA？（破坏细胞膜及核膜）DNA和蛋白质是染色体的主要成分思考：DNA在细胞内的存在部位？主要在细胞核少量位于线粒体及叶绿体要提取DNA，应当怎样处理细胞？破坏细胞结构完整性过滤后的滤液中是否即含有较为纯净的DNA？否大部分DNA和蛋白质结合形成染色体（破坏细胞膜及核膜）分析：如何将与DNA结合的蛋白质去除就成为粗提取DNA的关键所在！资料一：酶的专一性：一种酶只能作用于一种或一类底物有效成分：蛋白酶

4、功能：催化肉类中的胶原蛋白等蛋白质水解，使肉口感柔嫩、味道鲜美。木瓜、菠萝等水果中也含有丰富的蛋白酶。资料二：DNA是极性分子，不溶于酒精等非极性溶剂，但是部分蛋白质则可溶于酒精。加入95%冷酒精1.向溶解有DNA的溶液中加入等体积的、冷却的95%酒精溶液，静置。2.静置后溶液中出现白色丝状物，即粗提取获得的DNA。使用冷酒精作用：充分降低分子热运动速率，有利于DNA分子凝集析出。抑制核酸水解酶的活性，尽可能多的提取DNA。DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线资料三：DNA和蛋白质在NaCl溶液中的溶解度不同注意：此时提取的DNA中仍然存有一定量的杂质，还需进一步提纯。DNA+二

5、苯胺溶液变蓝沸水浴DNA的鉴定思考：如图所示，为何鉴定实验设有两根试管？讨论：是否还有其它能够对细胞中DNA进行粗提取的方法？