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时间：2020-02-06
《实验十一 植物体内过氧化物酶活性的测定.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实验十一植物体内过氧化物酶活性的测定——愈创木酚比色法一、原理过氧化物酶过氧化物酶[peroxidase,POD]广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应:RH2+H2O2→2H2O+R2POD分子结构特点POD是一种由单一肽链与卟啉构成的血红素蛋白,脱辅基蛋白分子须与血红素结合才构成全酶。3、POD的主要生理功能参与活性氧代谢过程；参与木质素和木栓质的合成；参与生长素的降解。注：除了与植物正常代谢和生长发育相关的结构型POD外,很大部分POD的合成属于诱导表达型。二、实验材料与试剂实验材料：不同浓度Cd处理7d
2、的菱叶片；试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.0）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）愈创木酚；H2O2。三、实验步骤提取酶液：叶片2片（wgFW）+pH7.0磷酸缓冲液5mL研磨，离心（4000rpm*10min），上清液即为粗酶液。2、配制反应液1mol/L磷酸缓冲液（pH6.0）50ml+28uL愈创木酚+19uLH2O2(30%)一般临用前配制，冰箱内短期保存。2、酶反应3mL反应液+0.2mL粗酶液，震荡混匀后立刻记时，以3mL反应液+0.2mL磷酸缓冲液调零，测OD470，30’’内读第一次数，之后每10S读数一次，至OD值>1.
3、000。3、计算酶活性选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算；以每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活力单位（U）。酶活力=W=W总（gFW)*V(mL)/V总w(gFW)活力单位(U)
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