植物体内过氧化物酶活性的测定.doc

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1、植物体内过氧化物酶活性的测定一、目的过氧化物酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能有一定关系，它在代谢中调控IAA水平，并可作为一种活性氧防御物质，消除机体内产生的H2O2的毒害作用。故在科研上常加以测定。二、原理在过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶竭色4－邻甲氧基苯酚，在470nm波长处测定生成物的吸光度（A）值，即可求出该酶活性。三、材料、仪器设备及试剂1.材料：植物叶片2.仪器设备：分光光度计；离心机；离心管；研钵；移液管；移液管架；试管；试管架；洗耳球。3.试剂

2、及配制：0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH7）。反应液（100ml0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH6）中加入0.5ml愈创木酚、1ml30﹪H2O2，充分摇匀）。四、实验步骤1.酶液提取称取植物叶片1g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为10mlpH7磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在8000r/min离心15min，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。2.酶活性测定吸取反应液3ml于试管中，加入酶提取液0.02ml（视酶活性可增减加入量），迅速摇匀后倒入光

3、径1cm的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长处，以时间扫描方式，测定3min内吸光度值变化，取线性变化部分，计算每分钟吸光度变化值（△A470）。五、酶活性计算按下式计算酶的相对活性△A470×酶提取液总量（ml）酶活性（△A470·g－1Fw·min－1）=———————————————————样品鲜重（g）×测定时酶液用量（ml）