植物生理实验过氧化物酶的活性

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1、班级：11级生科2班组员：XXXXX题目：过氧化物酶活性的测定过氧化物酶（POD）在植物体内普遍存在，是活性较高的一种酶，与植物代谢作用和抗逆性等都有一定关系。其主要生理功能：1.参与活性氧代谢过程2.参与木质素和木栓质的合成3.参与生长素的降解【实验原理】在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm处有最大光吸收值，故可通过测470nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。【材料、设备与试剂】1.材料：植物叶片或其它任何植物材料。2.仪器设备：分光光度计；低速冷冻离心机（配套的离心管）；恒温水浴锅；微波炉；研钵；容量瓶；移液管；试管；洗

2、耳球等。3.试剂及配制：0.2mol·L－1磷酸缓冲液（pH6）反应液（100ml0.2mol·L－1磷酸缓冲液中加入0.5ml愈创木酚、1ml30%H2O2，充分摇匀。最好在使用前配制。）【方法与步骤】1.酶液提取：称取植物叶片0.2g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为5mlpH6磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在4000r/min离心15min，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。2.酶活性测定：吸取反应液3ml于试管中，加入酶提取液0.1ml，迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长

3、处，测定OD值。每隔1min记录1次吸光值，共记录5次。3.结果计算：按下式计算酶的相对活性。取相对稳定的每分钟吸光度变化值（ΔA470），代入下式计算出过氧化物酶的活性，即用每min内OD变化0.01为1个过氧化物酶活力单位（U）表示。酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t式中：ΔA470——反应时间内吸光度的变化值。W——植物鲜重，g。Vt——提取酶液总体积，mL。Vs——测定时取用酶液体积，mL。t——反应时间，min。记录实验结果1minOD值2minOD值3minOD值4minOD值5minOD值6minOD值△A470完全0

4、.1770.5880.9881.3491.6821.9970.365缺P0.4190.7851.1371.4631.7632.0380.326缺N1.3621.6531.8552.0322.2012.3510.183缺Fe0.2940.4110.4990.5830.6590.7370.083缺Mg1.1301.9762.6703.0103.0103.0100.517缺K0.1290.5611.0411.4961.9302.3450.456数据处理：△A470的计算方法：分别用后1min的OD值减去前1min的OD值，然后去掉第一个和最后一个差值，剩余3个差值求平均值。1.完全

5、酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.365×5）/0.2×0.1×0.01×5]（U·g-1·min-1）=0.0456（U·g-1·min-1）2.缺P酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.326×5）/0.2×0.1×0.01×5]（U·g-1·min-1）=0.0408（U·g-1·min-1）3.缺N酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.183×5）/0.2×0.1×0.01×5]（U·g-1·min-1）=0.022

6、8（U·g-1·min-1）4.缺Fe酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.083×5）/0.2×0.1×0.01×5]（U·g-1·min-1）=0.0103（U·g-1·min-1）5.缺Mg酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.517×5）/0.2×0.1×0.01×4]（U·g-1·min-1）=0.0517（U·g-1·min-1）6.缺K酶活性（U·g-1·min-1）=（△A470×Vt）/W×Vs×0.01×t=[（0.456×5）/0.2×0.1×0.01×5

7、]（U·g-1·min-1）=0.057（U·g-1·min-1）分析结果：通过计算可得，经过缺素培养的玉米幼苗，它们的过氧化物酶的活性存在差异，其中缺K的最高，缺Fe的最低。说明缺素培养不光影响植物的叶片及整个植株的生长，而且影响到植物代谢产物的活性。