实验五过氧化物酶酶活性的测定

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1、植物组织中过氧化物酶活性的测定——愈创木酚比色法一、实验目的熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。过氧化物酶（POD)过氧化物酶广泛存在于植物体中，是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度。此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视。二、实验原理RH2+H2O2→2H2O+R在有过氧化氢存在的条件下

2、，过氧化物酶能使邻甲氧基苯酚（愈创木酚）氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测量470nm处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。三、实验材料菠菜、油菜、树叶、草、四、仪器用品与试剂分光光度计，研钵，移液管，吸管愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液五、实验步骤1、称取植物材料0.5g，剪碎，放入研钵中，加入1ml磷酸缓冲液（0.05mol/L）研磨成匀浆，以12000rpm离心15min，上清液即为粗酶液。试剂01230.01mol/L磷酸缓冲液，ml0.02mol/L愈创木

3、酚，ml酶液，ml2.920.0502.90.050.022.90.050.022.90.050.02加好反应物，摇匀，立即加新配制的H2O2(0.01ml)，即刻摇匀并计时，每隔30s读数1次，共计6个数值。对照管测定管六、实验结果式中：ΔA470——反应时间内OD变化值W   ——植物鲜重（g）t   ——反应时间（min）过氧化物酶活力=ΔA470W×0.01×t用每minOD值变化0.01作为1个过氧化物酶活性单位（U）表示七、思考题说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。