yx 微生物的实验室培养(学案)(无答案).doc

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1、yx…微生物的实验室培养(学案)(无答案)专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养目标导航1•了解有关培养基的基础知识,掌握无菌操作技术的有关内容。2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。3•学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。一、培养基与无菌技术1・培养基(1)概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的-(2)成分：一般含冇、、、,止匕夕卜还要满足微生物对(即生长因子)、以及氧气的需求。毒的是活鸡胚。2.无菌技术(1)概念：防止一切外來杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌

2、区域不再被污染的方法，称为无菌技术。注意在微生物的实验室培养屮，无菌技术的核心是,□(2)无菌技术的具体内容%1对实验操作的、操作者的进行清洁和消毒。%1将用于微生物培养的、接种用具和培养基等进行%1为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在进行。%1实验操作时应避免己处理的材料用具与周围的物品相接触。（3）消毒和灭菌的概念%1消毒：消毒是指使用的物理或化学方法杀死物体表面或内部的（不包括芽抱和抱子）。%1灭菌：灭菌是指使用的理化因素杀死物体内外，包括0③消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是O拓展深化

3、某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽砲。每个细菌细胞仅形成一个芽砲，故它无繁殖功能。芽泡有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽泡的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。抱子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞,个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。（一）配制培养基1.配制原则（1）（根据微生物的种类、培养目的等），如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养基内可加入化学

4、成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入己知化学成分的物质。⑵,注意各种营养物质的浓度和比例。⑶，各种微生物适宜生长的pH范围不同，细菌6.5〜7.5、放线菌7.5〜8.5、真菌5.0〜6.0。注意①不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。②营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用,另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基

5、屮的碳源与氮源的比为4：1时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3：1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2・配制方法(以制备丫肉U蛋白腺固体培养基为例)(1)2(2)实验流程提醒合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，耍放在恒温箱中保温l~2d,若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。(二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由…个大肠杆菌繁殖而來，这就需接种时尽量接种单个的大

6、肠杆菌。1•微生物接种的方法微生物接种的方法最常用的是和两种。(1)是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。%1将放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。%1在火焰旁冷却接种环，并打开盛冇菌液的试管的O%1将试管口通过酒精灯的O%1将已冷却的接种环伸入菌液中，一环菌液。%1将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。%1将培养II1L1UL盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入,划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不耍划破培养基。⑦灼烧接种环，待其冷却后，

7、从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将的划线与相连。⑧将,放入培养箱中培养。⑵则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。%1系列稀释操作a.取盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101-106的顺序编号。b.用吸取：LmL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。c.从101倍稀释的试管屮吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀,获得1

8、02倍液。依此类推。%1涂布平板操作a.将浸在盛有酒精的烧杯中。b.取不超过0.1mL的,滴加到培养基表面。c.将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8〜10Sod.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。1.注意事项⑴平板划线法①操作第一步即取菌种Z前及每次划线Z前都需耍进行，划线操作结束吋，仍需灼烧O②从第二次以后的划线操作总是从开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2