微生物的实验室培养学案(有答案).doc

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1、专题二微生物的培养和应用课题1微生物的实验室培养【目标定位】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【自主预习】一、培养基：1.概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2.营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3.培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。K思考^从细胞的化学元索组成来看，培养基屮为什么都含有这些营养成分？二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论冋答下列问题：(

2、-)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：1.对实验操作的、操作者的和进行02・将用于微生物培养的、和等器具进行。3.为避免周围环境屮微生物的污染，实验操作应在附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。(二)消毒和灭菌1.消毒是指o常用的方法有、、消毒法。2.灭菌是指o常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？K思考2为无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？K思考3』利用干热火菌箱对玻璃器皿火菌时物品不能摆得太挤，日的是什么？K思考4』物品装入高压熬汽火菌锅火菌后，要首先打开排气阀，丸沸并扌非除锅内冷空气

3、,其目的是:随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为，并维持min；最后切断热源，使温度白然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。三、实验操作一一大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是,本实验可分成和两个阶段进行。（一）制备牛肉膏蛋白豚固体培养基1制备牛肉膏蛋刨东固体培养基的操作步骤是:K思考5』在制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的称最操作屮，动作要迅速，原因是什么？溶化操作屮需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？K思考6』牛肉膏和蛋白腺主要为微生物提供什么等营养物质？1.倒平板：待培养基冷却至°C左右时在酒精灯火焰附近操作迸•行。其过程是：

4、%1在火焰旁右手拿,左手;%1使锥形瓶的瓶口;%1左手将培养血,右手,立刻盖上皿盖。%1待平板冷却凝固后，将平板。K思考73锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？K思考8』平板倒置的目的是什么？K思考9』若川1•盖和川L底z间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？（二）纯化大肠杆菌微工物接种：最常用的是法和法。另外还侑穿刺接种和斜曲接种等。1.平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：%1将在酒精灯火焰上灼烧玄至0%1在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。%1将菌种试管口通过火焰达到的目

5、的。%1将冷却的接种环伸入到0%1将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。%1将盖打开一条缝隙，把接种环,盖上1111盖，不要划破培养基。%1灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程,完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。%1将平板培养。K思考103取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环?取菌种和划线前都要求接种环冷却示进行，加目的是?最后灼烧接种环的目的是？在作第二次以及其示的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线?1.稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度,然后将进行培养。当稀释倍数足够高

6、时，即可获得单个细菌形成的系列稀释操作：%1取盛有mL水的无菌试管6支,编号10】、102>101010106o%1用灼烧冷却的移液管吸取—mL菌液注入编号为10】试管屮，并吹打3次使Z混匀。%1从倍液屮吸取mL菌液注入到编号为IO?试管内吹打均匀，获得IO?倍液。依此类推。K思考11》系列稀释操作的注意事项是什么？涂布平板操作：⑴将浸在盛有的烧杯屮。⑵取少量（不超过）,滴加到培养基表面。⑶将的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却。⑷用涂布器将菌液地涂布在培养基的表面。涂布时可,使菌液分布均匀。四、结果分析与评价1.培养未接种培养基

7、的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2.在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3•培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？K思考12』在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？K思考13》频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？【随堂检测设计】1.下列关于微生物营养的说法，正确的是A.同一种物质不可能既作碳源乂作氮源B.凡是碳源都能提供能量c・除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也能提供能量1.细菌培养过稈屮分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等儿种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A

8、.接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针C・培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅2.以下关于制备牛肉育蛋白豚間体培养基的叙述错.误的是A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板