食品中志贺氏菌检验.ppt

《食品中志贺氏菌检验.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、志贺氏菌检验一、实验目的了解食品安全与志贺氏菌检验关系1了解志贺氏菌生理形态化学性质2掌握志贺氏菌检验方法和结果判断3检验食品中是否有志贺氏菌4二.实验原理需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2nm，能分解葡萄糖，产酸不产气。不发酵乳糖，靛基质产生不定，甲基红阳性，VP试验阴性，不分解尿素，不产生H2S。根据生化反应可进行初步分类。三、实验的试剂和仪器仪器与设备试剂和仪器培养基与试剂仪器与设备规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样

2、品2、500ml三角瓶1个制增菌液3、250ml三角瓶4个制培养基4、18×180mm试管制三糖铁培养基5、13×100mm试管制蛋白胨水等6、1ml移液管7、10ml移液管8、直径为90mm平皿5副制SS、EMB平板9、250ml量筒1个10、玻璃棒11.、恒水浴箱1个12、显微镜1台镜检培养基与试剂GN增菌液225ml/瓶1瓶500ml三角瓶EMB培养基100ml/瓶1瓶250ml三角瓶SS琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶三糖铁斜面6ml/支6支15×150mm试管葡萄糖半固体培养费基4ml/支5支13×100mm试管蛋白胨水2ml/支5支13×100mm试管5%乳糖发

3、酵管3ml/支5支13×100mm试管甘露醇发酵管3ml/支5支13×100mm试管棉子糖发酵管3ml/支5支13×100mm试管甘油发酵管3ml/支5支13×100mm试管四、实验步骤验步骤实流程图操作步骤流程图采样↓样品处理↓选择性增菌↓选择性平板划分↓生化实验↓镜检↓结果报告实验前的准备对烧杯、玻璃棒、移液管、试管、培养皿、锥形瓶的清洗注意：洗涤后的仪器应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠对试管、玻璃棒、移液管、锥形瓶、烧杯、培养皿进行包扎：要将报纸裁成5-10公分，成30°卷起，结尾处向上折叠即。包扎灭菌培养基的制备1.CN增菌液成分:胰蛋白胨20g柠檬酸钠5g磷酸二

4、氢钾1.5g葡萄糖1g去氧胆碱酸钠0.5g氯化钠5g甘露醇2g磷酸氢二钾4g蒸馏水1000mlph7.0制法：按上述成分配好，加热溶解，校正PH。分装每瓶225ml，115C高温灭菌15min2、HE琼脂成分：蛋白胨12g水杨素2g蒸馏水1000ml乙液20ml牛肉膏3g胆盐20g0.4%溴麝香草芬兰钠溶液16ml乳糖12g氯化钠5g蔗糖12g琼脂20g甲液20mlHP7.5制法：将蛋白胨、乳糖、水杨素、氯化钠、蔗糖、牛肉膏、胆盐等溶解于400ml蒸馏水中作为基础液；加琼脂与600ml蒸馏水中，加热溶解。加入甲液乙液与基础液中，校正HP,再加指示剂。并与琼脂液合并，冷却，倾注平板

5、，培养基的制备3、SS琼脂液的配制成分：牛肉膏0.6g琼脂2.04g三号胆盐0.42g蒸馏水120ml，月示胨0.6g制法：将牛肉膏、月示胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中，将琼脂加入600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，再将两液混合121℃高压灭菌15min,保存备用。4、麦慷慨琼脂液的配制成分：蛋白胨2.04g脙胨0.36g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g氯化钠0.6g琼脂2.04g蒸馏水120mL乳糖1.2g0.01%结晶紫水溶液1.2mL0.5%中性红水溶液0.6mL制法：ⅰ将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2，将琼脂加入于600ML蒸馏水中，加热溶解。

6、将两液合并，分装于121℃高压灭菌15min备用。ⅱ临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后　倾注平板。培养基的制备5、伊红美蓝琼脂（EMB）成分：蛋白胨10g2%伊红溶液20ml乳糖10g0.65%美兰溶液10ml磷酸二氢钾28g蒸馏水1000ml琼脂17gPH7.1制法：将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中，校正ph，分装于烧杯内，121c高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶解琼脂，冷却，加入伊红和美蓝溶液，摇匀。倾注平板。6、三糖铁琼脂的配制成分：蛋白胨4.8g牛肉膏0.6g乳糖1.2g蔗糖1.2g葡萄糖0.12g氯化

7、钠0.6g硫酸亚铁胺0.024g硫代硫酸钠0.024g琼脂0.72g酚红0.003g蒸馏水120mLpH7.4制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。培养基的制备7、生理盐水的配制成分Nacl0.9g,蒸馏水100ml制法一般每种检样配制250ml生理盐水。称取2.2gNacl，加入250ml蒸馏水溶液