《志贺氏菌检验》PPT课件.ppt

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1、志贺氏菌的检验一、流行病学简介一种古老的肠道传染性腹泻。19世纪曾出现全世界菌痢的大流行。1899年，日本人志贺氏首先发现菌痢是由痢疾杆菌引起。第一次世界大战期间（1914-1918年），德国死于痢疾者约4万余人，并进一步证实痢疾杆菌是菌痢流行的病原。细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病率最高的肠道传染病。近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺菌病死率达5%-15%。我国属发展中国家，人民的生活条件虽然在不断改善，但由于部分地区卫生知识普及不够，食品卫生管理、监督不力，使得志贺菌的感染在我国传染病中多年来一直处于较高

2、的地位。每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴发的发病人数在数十人到上千人不等。多数由于食物和饮水污染引起。1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起26所小学的学生因课间餐食用豆奶导致1345人食物中毒的事故，后经调查是一起志贺菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的食物中毒，此次爆发波及范围之大，发病人数之多，在我国历史上颇为少见。志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可引起发病。是否发病，取决于细菌数量、致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的抵抗力。各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是引起全身毒血症的主要因素。志贺菌还可产生

3、外毒素（志贺毒素），具有神经毒、细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临床表现如溶血性尿毒综合症等。二、生物学特性（一）、形态与染色革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛2~3um*0.5~0.7um（二）、培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.42、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。（三）、生化反应1、发酵葡萄糖

4、，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。4、甲基红阳性。（四）、抗原结构1、抗原构成：O抗原：群特异性抗原：A、B、C、DK抗原：除B群外，一般有K抗原2、志贺氏菌的分群与血清型志贺氏菌分为四群：A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种，C群（鲍氏志贺氏菌）：1~15型D群（宋内氏志贺氏菌）：1个型三、志贺氏菌检验GB4789.5-20121.以原国标为基础，保持与原标准的

5、连续性考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法2.与国际接轨的原则该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准，部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准3.与现有已颁布的新版国家标准协调统一参考了已颁布的2008版国标，在样品的前处理步骤，培养条件的选择，文字描述等方面尽量保持一致。GB/T4789.5-2003标准不足处1.采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌,检测效果较差2.使用的分离平板SS对志贺1型有抑制3.

6、检验方法与现行的其它国家的标准存在差异增菌：用GN增菌液使处于濒死状态的细菌恢复活力选择性平板分离培养：XLD+MAC/显色培养基生化试验：可采用API20E或VITEK2血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种。志贺氏菌操作流程修改的内容增菌部分志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）原国标：GNISO：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL和3μg/mL）NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）培养条件：41.5℃±1℃厌氧培养原国标：37℃需氧培养I

7、SO：41.5℃厌氧培养FDA：42℃（除宋内其他志贺菌)和44℃（宋内）厌氧培养NMKL：42℃厌氧培养分离用平板原国标：HE或SS;MAC或EMBISO：MAC、XLD、HEFDA：MACNMKL：MAC、XLD、HE（一）增菌培养用志贺氏菌增菌液增菌,41.5℃±１℃，16h～20h厌氧培养。智能厌氧微需氧培养系统（二）分离培养取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或R&F志贺氏菌显色培养基平板上于36℃1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态若出现的菌

8、落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。菌落特征MAC琼脂：无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径2～3mmXLD琼脂：粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径1～2mmR&F志贺氏菌显色琼脂：白色，不透明、圆形、边缘不整齐，直径1mm～3mm，菌落周围琼脂颜色变为紫红色志显1宋内氏典型菌落XLD