志贺氏菌检验.ppt

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1、志贺氏菌的检验一、流行病学简介一种古老的肠道传染性腹泻。19世纪曾出现全世界菌痢的大流行。1899年，日本人志贺氏首先发现菌痢是由痢疾杆菌引起。第一次世界大战期间（1914-1918年），德国死于痢疾者约4万余人，并进一步证实痢疾杆菌是菌痢流行的病原。细菌性痢疾历年来一直是我国夏秋季发病率最高的肠道传染病。近年来报道非洲及中美洲流行的痢疾志贺菌病死率达5%-15%。我国属发展中国家，人民的生活条件虽然在不断改善，但由于部分地区卫生知识普及不够，食品卫生管理、监督不力，使得志贺菌的感染在我国传染病中

2、多年来一直处于较高的地位。每年均有志贺菌感染暴发的报告，每次暴发的发病人数在数十人到上千人不等。多数由于食物和饮水污染引起。1994年5月11日，江苏省无锡市发生一起26所小学的学生因课间餐食用豆奶导致1345人食物中毒的事故，后经调查是一起志贺菌和致病性大肠杆菌混合感染引起的食物中毒，此次爆发波及范围之大，发病人数之多，在我国历史上颇为少见。志贺菌致病力强，少量细菌进入人体即可引起发病。是否发病，取决于细菌数量、致病力（粘附、侵袭力、毒素）和人体的抵抗力。各种志贺菌都可以产生强烈的内毒素，是引起

3、全身毒血症的主要因素。志贺菌还可产生外毒素（志贺毒素），具有神经毒、细胞毒和肠毒性作用，能引起更严重的临床表现如溶血性尿毒综合症等。二、生物学特性（一）、形态与染色革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛2~3um*0.5~0.7um（二）、培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.42、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中

4、呈均匀混浊生长，无菌膜。（三）、生化反应1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。4、甲基红阳性。（四）、抗原结构1、抗原构成：O抗原：群特异性抗原：A、B、C、DK抗原：除B群外，一般有K抗原2、志贺氏菌的分群与血清型志贺氏菌分为四群：A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种，C群（鲍氏志贺氏菌）：1~15型D群（宋内氏志贺氏菌）：1个型三、

5、志贺氏菌检验GB4789.5-20121.以原国标为基础，保持与原标准的连续性考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法2.与国际接轨的原则该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准，部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准3.与现有已颁布的新版国家标准协调统一参考了已颁布的2008版国标，在样品的前处理步骤，培养条件的选择，文字描述等方面尽量保持一致。GB/T4789.5-2003标准不足处1.采用GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后

6、大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌,检测效果较差2.使用的分离平板SS对志贺1型有抑制3.检验方法与现行的其它国家的标准存在差异增菌：用GN增菌液使处于濒死状态的细菌恢复活力选择性平板分离培养：XLD+MAC/显色培养基生化试验：可采用API20E或VITEK2血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种。志贺氏菌操作流程修改的内容增菌部分志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）原国标：GNISO：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL和3μg/mL）NM

7、KL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）培养条件：41.5℃±1℃厌氧培养原国标：37℃需氧培养ISO：41.5℃厌氧培养FDA：42℃（除宋内其他志贺菌)和44℃（宋内）厌氧培养NMKL：42℃厌氧培养分离用平板原国标：HE或SS;MAC或EMBISO：MAC、XLD、HEFDA：MACNMKL：MAC、XLD、HE（一）增菌培养用志贺氏菌增菌液增菌,41.5℃±１℃，16h～20h厌氧培养。智能厌氧微需氧培养系统（二）分离培养取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分别划线接种于XLD琼脂

8、平板和MAC琼脂平板或R&F志贺氏菌显色培养基平板上于36℃1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。菌落特征MAC琼脂：无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径2～3mmXLD琼脂：粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐，直径1～2mmR&F志贺氏菌显色琼脂：白色，不透明、圆形、边缘不整齐，直径1mm～3mm，菌落周围琼脂颜色变为紫红色志显1宋内氏典型菌落XLD2