志贺氏菌检验操作规范.doc

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1、上海味泽生物科技有限公司志贺氏菌检验1范围本标准规定了食品中志贺氏菌的检验方法。本标准适合用于各类食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。2术语和定义2.1志贺氏菌志贺氏菌shigella是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dyseaterybacteria。致病性较强，感染10-200个即可发病，人类是唯一的患者和带菌者。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量0.1g。3

2、.5震荡器。3.6无菌吸管:1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。3.7无菌锥形瓶：250ml500ml。3.8无菌培养皿：直径90mm。4培养基和试剂4.1GN增菌液4.2HE琼脂4.3SS琼脂4.4麦康凯琼脂4.4伊红美蓝琼脂（EMB）4.5三糖铁琼脂（TSI）4.6葡萄糖半固体管5操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样25g(ml),加入装有225mlGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于

3、36℃±1℃培养6h～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。5.2分离和初步生化试验5.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36℃±1℃培养18h～24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。5.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃±1℃培养18h～24h，分别观察结果。5.3判定下述培养物可以弃去：a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生

4、长的培养物；b)在18h～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d）产气的培养物；e）有动力的培养物；f）产生硫化氢的培养物。凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验或送检。