食品沙门志贺氏菌.ppt

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1、食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.4-2010志贺氏菌检验GB/T4789.5-2003菌种传代与保藏沙门菌的分布沙门菌广泛存在于自然环境中。通过沙门菌病患者或健康带菌的人和动物的排泄物污染环境和食品。易于污染的高危食物：畜禽肉类、蛋、奶及其制品。沙门菌在肉类中不分解蛋白质，不产生靛基质，所以当食品污染了沙门菌后，通常没有感官性状的改变。沙门氏菌检验程序目的：修复损伤的细菌细胞。缓冲蛋白胨水(BPW)肉汤：是基础增菌培养基，不含任何抑制成分，有利于受损伤的沙门菌复苏。使受损伤的沙门菌细胞恢复到稳定的生理状

2、态。方法：25g（mL）样品置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀，直接进行培养。于36℃±1℃培养8h～18h。前增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mLTTB内,于42±1℃培养18～24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36±1℃培养18～24h。分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36±1℃分别培养18～24h(XLD琼脂平板、H

3、E琼脂平板、显色培养基平板)或40h～48h(BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。选择性增菌与分离划线接种，分离纯化典型菌落--BS菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。国产BS进口BS典型菌落--XLD进口XLD国产XLD菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心典型菌落--CHRO菌落为紫红色初筛微生物菌落颜色沙门氏菌紫色(直径约1mm)柠檬酸杆菌属蓝

4、色(直径约1mm)变形杆菌无色或被抑制注意事项亚硫酸铋琼脂（BS）：该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备必要时复查。志贺氏菌需氧或兼性厌氧。在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、中等大小的菌落。在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。志贺氏菌检验程序采样样品处理选择性增菌选择性平板分离生化试验结果报告1.样品处理：无菌操作称取检样25g（mL），置于盛有

5、225mLGN增菌液的无菌均质袋中，用拍击式均质器以8000r/min～10000r/min均质拍打1min～2min。2.增菌培养：置于36℃培养6-8h，培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微浑浊时即应中止培养。3.分离：分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个SS琼脂平板和一个EMB平板。于36±1℃分别培养18～24h(观察各个平板上生长的菌落，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落）。志贺氏菌检验注意事项1.志贺菌在常温存活期很短，因此，当样品采集后，应尽快进行检验，如果在24h内

6、检验，样品可保存在冰箱内。2.增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺菌的阳性检出率，用于分离的鉴别培养基一般不少于两个。中等选择性的SS琼脂平板一个，弱选择性的EMB琼脂平板一个。鉴定API20EVITEK菌种的传代与保藏菌种保藏及应用干菌种（0代）液体培养基复苏（1代）液体培养基复壮（2代），加等体积20%无菌甘油混匀，1ml/管冻存管分装，-20℃或-80℃保存。使用时取1支冻存管自然（室温）解冻，接种至5ml液体培养基按规定培养、稀释（3代）注意：已经解冻的冻存管不能再冷冻保存，以免冻融！我国提供的标准菌种通常

7、是以冻干粉的形式包装于熔封的厚玻璃容器中。干菌种(安瓿)的开启：菌悬液的制备每次使用取分装好的甘油冻存管移入接种室或净化工作台，放置室温后接种至已灭菌营养肉汤中(5ml/支,生孢梭菌用10ml硫乙醇酸盐流体培养基),将已接种毕的细菌管置35~37℃培养18~24小时，取出备用。各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。操作步骤1、接种前用1：1000新洁尔灭擦拭工作台面，然后开紫外灯消毒30分钟。2、自冰箱取出保存工作用菌种，室温放置20分钟，温度平衡后才能传代。3、实验人员进入缓

8、冲间，换鞋、穿无菌衣、戴口罩，用1：1000新洁尔灭溶液消毒双手，并将培养基及菌种移入阳性菌接种室。4、接种后置规定温度、时间培养。取出观察，菌种生长良好，放入冰箱保存备用。2-8℃可保存6个月；-20℃可保存12个月；-80℃可保存24个月。保存时挑取细菌新鲜纯培养物，接入菌种保存管。拧紧保存管，来回颠倒几次使细菌乳化，不能旋摇。用无菌移液器将菌种保存管内的液体吸取干净