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《建立改良型人NK细胞体外扩增技术_李亚芬.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·250·免疫学杂志2015年3月第31卷第3期IMMUNOLOGICALJOURNALVol.31No.3Mar.2015·论著·[文章编号]1000-8861（2015）03-0250-05；[DOI]10.13431/j.cnki.immunol.j.20150053建立改良型人NK细胞体外扩增技术*李亚芬，周如苑，孟会敏，安钢力，宗云辉，游凤涛，张波桢，杨林[摘要]目的建立一种改良型的NK细胞扩增技术。方法分离4名健康人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC），采用工程细胞pAPC-mbI
2、L-21和IL-2对NK细胞进行体外扩增，应用细胞计数法和流式细胞术分别比较NK细胞的扩增倍数和NK细胞纯度，并采用CFSE/7-AAD法对肿瘤细胞K562和RPMI-8226进行细胞毒性实验检测杀伤效率。结果经过21d的刺激培养，NK细胞平均扩增至409.4倍，细胞纯度最高可达95.86%。杀伤实验结果显示，扩增的NK细胞对K562细胞杀伤率高达85.2%。结论pAPC-mbIL-21工程细胞联合IL-2能够在体外高效的扩增出具有较高杀伤活性的NK细胞，可以为NK细胞免疫治疗奠定基础。[关键词]NK细胞；体外扩增；pAPC-mbIL-21；免疫
3、治疗[中图分类号]R392.12[文献标识码]AConstructionofanimprovedmethodforhumanNKcellexpansioninvitro11112,32,32,3LIYafen,ZHOURuyuan,MENGHuimin,ANGangli,ZONGYunhui,YOUFengtao,ZHANGBozhen,YANG1,2,*Lin1.CyrusTangHematologyCenter&InnovationCenterofHematology,SoochowUniversity,Suzhou215123,China;
4、2.SuzhouCancerImmunotherapy-DiagnosisandNanomedicineEngineeringTechnologyCenter,Suzhou215123,China;3.PersongenBiomedicine(Suzhou)Co.,Ltd.,Suzhou215123,China*CorrespondingAuthor:YANGLin,E-mail:yanglin@suda.edu.cn[Abstract]ThisstudyistoestablishanimprovedapproachofhumanNKcellex
5、vivoexpansion.Theperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)from4healthydonorswereisolatedandstimulatedwithpAPC-mbIL-21(PersonGenartificialantigenpresentingcells-mbIL-21)andIL-2simultaneously.ProliferatedcellswerecountedandtheNKcellphenotypewasdeterminedbyflowcytometryanalysis.Then
6、thecytotoxicityofexpandedNKcellstoK562andRPMI-8226wasexaminedbyCFSE/7-AADassay.Afterculturingfor3weeks,NKcellswere-+significantlyamplifiedandtheaveragemultipleswere409.4.ThepurityofCD3CD56cellswas95.86%,meanwhilethecytotoxicactivitytoK562was85.2%.Therefore,weconcludethatthees
7、tablishedmethodisanefficientapproachforNKcellexpansionexvivo;theNKcellsexpandedshowhighcytotoxicityandcouldlayfoundationforNKcellimmunotherapy.[Keywords]NKcell;Expansioninvitro;pAPC-mbIL-21;ImmunotherapyNK细胞又称为自然杀伤细胞，属于大颗粒淋巴在过继细胞免疫治疗中被广泛应用。但NK细胞在外细胞，来源于骨髓，占外周血淋巴细胞的5%~15%，是周血淋
8、巴细胞中所占的比例较低，所以有必要建立一重要的免疫细胞。科学家在1975年首次鉴定到了种NK细胞体外扩增技术，用于研究NK细胞的功能NK
