【生物工程专业】【毕业设计】淀粉酶菌株鉴定及酶的制备

《【生物工程专业】【毕业设计】淀粉酶菌株鉴定及酶的制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、（20届）毕业论文淀粉酶菌株鉴定及酶的制备II摘要:从自然界中分离得到一株高产淀粉酶菌株，根据菌落形态和常规生理生化鉴定方法对菌株进行鉴定，为了确定该菌株在分类学上的位置，对这一菌株进行16SRNA分子鉴定。主要是通过16SrDNA测序与GenBank中已有的序列比对来鉴定菌种，序列比对鉴定为与Bacillusamyloliquefaciens有99%的相似度。通过分级盐析进行酶制备，纯化倍数为4.99，活力回收率为33%。实验对菌株进行了酶学性质的研究，该酶的最适反应温度为60℃，最适反应pH值为6.0。关键词:淀粉酶；菌种鉴定；酶制备IIAbstra

2、ct:Astrainofamylaseproducingwasisolatedfromnature.Thestrainwasidentifiedbytheshapeandgeneralphysiologicalandbiochemicalproperties.Inordertoconfirmthelocationintaxonomy,16SrDNAsequenceofthestrainwassequencedandithadthesimilarityof99％withthatoftheBacillusamyloliquefaciens.Amylasewh

3、ichisextracellularinincubationperiodofthestraincanbepurifiedbysaltout.Theoptimumtemperatureofamylaseis60℃andtheoptimumpHis6.0.Keywords:amylase;strainidentification;preparationsofenzymesII目录摘要……………………………………………………………………………………………………ⅠAbstract………………………………………………………………………………………………Ⅱ1绪论11

4、.1高产淀粉酶的来源11.2菌种鉴定的方法概况11.3α-淀粉酶的研究21.3.1α-淀粉酶分离纯化方法的研究21.3.2α-淀粉酶活力测定方法的研究31.4淀粉酶的应用31.4.1在食品工业中的应用31.4.2在造纸业中的应用31.4.3在清洁剂生产中的应用31.4.4在医药行业中的应用32实验方法42.1材料、试剂和仪器42.1.1生物材料42.1.2主要试剂42.1.3培养基配方42.1.4主要仪器和设备42.2实验方法52.2.1菌种活化和培养52.2.2菌落及生理生化特性鉴定52.2.3菌种的分子鉴定52.2.4菌种的发酵62.2.5淀粉酶活力

5、测定62.2.6蛋白质含量的测定62.2.7酶的制备62.2.8酶学性质研究73结果与分析93.1菌落生理生化特性鉴定93.2菌株分子鉴定结果93.3淀粉酶分离纯化结果103.4淀粉酶酶学性质的研究结果113.4.1酶反应的最适温度和酶的热稳定性研究113.4.2酶反应的最适pH值和酸稳定性124结论14参考文献15致谢171绪论淀粉酶是一种能催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其它低聚糖的一群酶的总称，它是最早用于工业化生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖，是水解α-1,4-糖

6、苷键的酶。不同种类的淀粉酶水解淀粉会生成不同的糖类产物，根据淀粉水解生成糖类产物的异头碳原子构型的不同可将淀粉酶分为α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶作用于淀粉时从淀粉分子的内部随机切开α-1,4糖苷键，生成糊精和还原糖，α-淀粉酶分布广泛，已是一种十分重要的酶制剂，α-淀粉酶大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、和医药行业等，它占了整个酶制剂市场份额的25%左右[1]。1.1高产淀粉酶的来源除动物自身消化道可分泌一些淀粉酶外，淀粉酶的另外两大来源是植物和微生物，但是在我国，淀粉酶制剂的品种和生产菌株都很单一，淀粉酶酶活也较国外同行业低。在近年来的菌

7、种选育中，尽管转导转化和基因克隆等现代分子生物学技术已经广泛应用，但是目前投入商业化生产的淀粉酶生产菌株几乎都是通过从自然界中分离得到的野生型菌株，然后加以改良得到。1.2菌种鉴定的方法概况[2]通常可把微生物的分类鉴定方法分成4个不同水平：①细胞的形态和习性水平，例如用经典的研究方法，观察微生物的形态特征、运动型、酶反应、营养要求、生长条件、代谢特性、致病性、抗原性和生态学特性等；②细胞组分水平包括细胞壁、脂类、醌类和光合色素等成分的分析；③蛋白质水平，包括氨基酸序列分析、凝胶电泳和各种免疫标记技术等；④核酸水平，包括G+Cmol%值的测定，核酸分子杂

8、交，16S或18SrRNA寡核苷酸序列分析，重要基因序列分析和全基因组测序等。1