塘养三疣梭子蟹中弧菌的群落结构分析【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）塘养三疣梭子蟹中弧菌的群落结构分析目录0引言11材料与方法11.1材料11.1.1样品11.1.2试剂11.1.3仪器设备21.2方法21.2.1样品采集21.2.2菌落计数[14]21.2.3划线分离31.2.4斜面保种31.2.5弧菌总DNA提取31.2.5.1传统的酚-氯仿抽提法[15]31.2.5.2细菌基因组DNA快速提取法31.2.616SrDNA的测序31.2.7变性梯度凝胶电泳（DGGE）41.2.8基因序列比对以及系统发育树构建42结果与讨论52.1弧菌总菌数测定结果52.2弧菌菌落结构特点分析52.3弧菌数量及种属分布

2、变化与三疣梭子蟹发病的关系93小结10致谢10参考文献11摘要：本课题采用传统的微生物培养方法与现代分子生物学（PCR-DGGE）、生物信息学的结合，对鄞州区养殖塘三疣梭子蟹中弧菌群落结构进行分析和研究，并同时分析了弧菌的种群组成与弧菌病的关系。得到并测序的22株弧菌，结果显示，其中含有4个不同的种，分别为Vibrioalginolyticus，V.campbellii，V.natriegens和V.harveyi。优势菌株为Vibrioalginolyticus和V.harveyi，分别有7株和11株，占测序成功菌株的31.8%和50.0%。同时发现：V.har

3、veyi是引发三疣梭子蟹疾病的主要原因。本课题的研究结果可为今后开发、利用、鉴定弧菌资源以及海水水产养殖的病害防治提供依据。关键词：三疣梭子蟹；弧菌；群落结构；弧菌病Abstract:Inthisstudy,weadoptedtraditionalmicrobialculturemethodswithmodernmolecularbiologyandbioinformaticsmethodstoanalyzethecountandcommunitystructuresaboutVibrioofthePortunustrituberculatus’sBodyliqu

4、idinCulturePondofyinzhou.Then,phylogenetichasbeenanalysedtherelationshipbetweenVibrioandVibriosis.Wesequenced22isolatedstrainsofVibrio,whichbelongto4differentspecies,Vibrioalginolyticus,V.campbellii,V.natriegensandV.harveyi.VibrioalginolyticusandV.harveyieachinclude7and11strainsarethe

5、dominantstrains.Andithasaccountedfor31.8%and50.0%ofthetotalnumberofisolatedVibrio.Thestudywillbeathereunderfordevelopment,useandidentificationofVibrioresources,diseasepreventionandcontrolinmarineaquacultureinthefuture.Keywords:Portunustrituberculatus;Vibrio;communitystructure;Vibriosi

6、s0引言三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）是我国海产经济蟹类，其肉质鲜美、营养丰富、经济价值高，在国内外享有盛名。近年来，由于养殖规模的不断扩大、养殖密度不断提高、养殖环境的污染等导致了三疣梭子蟹免疫防御系统抗病力下降，对病害的易感性增加，疾病频繁发生，对水产养殖动物规模化养殖和发展造成了巨大的威胁，尤其以弧菌病最为严重。弧菌病（Vibriosis）作为弧菌所引起一种细菌性疾病，是最早发现的鱼类细菌性疾病之一，现已成为海水养殖动物主要细菌性病害之一[1-4]，对养殖业的危害严重，常常造成极大的经济损失。因此，该类疾病的弧菌也一直备受国内外

7、研究工作者的关注，是海水养殖动物病害的主要研究领域之一。弧菌（vibrio）属于弧菌科(Vibrionaceae)弧菌属，是一群具极生鞭毛、能运动、无芽胞、氧化酶阳性、发酵型的，革兰氏阴性杆状或弯曲状细菌。弧菌属比较庞杂，最近出版的《伯杰氏细菌鉴定手册》第9版（1994年）[5]共收入了34个种，6个生化变种，其中至少有12个种与人类感染有关。弧菌广泛存在于海水、淡水和水生动物中，是海洋环境中常见的细菌类群之一，该类细菌具很强的适应性和抗逆性，因此成为海水环境的优势种群，尤以溶藻弧菌（V.alginolyticus）、副溶血弧菌（V.prarhaemolyticu

8、s）、鳗弧