免培养法研究三疣梭子蟹养殖塘细菌群落演替【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）免培养法研究三疣梭子蟹养殖塘细菌群落演替目　录1前言12材料和方法12.1样品采集12.2水样的总DNA提取12.2.1试剂12.2.2菌体收集12.2.2总DNA提取12.3PCR扩增16SrDNA全序列22.416SrDNA克隆文库的构建及测序32.4.1PCR产物的纯化、回收与连接32.4.2E.coil感受态细胞的制备32.4.3连接产物的转化32.5PCR-DGGE技术32.6基于16SrDNA的系统发育学分析53结果与讨论63.1A克隆文库分析63.1.1PCR-DGGE分析63.1.2系统发育学分析73.2B

2、克隆文库分析93.2.1PCR-DGGE分析93.2.2系统发育学分析113.316SrDNA克隆文库的多样性分析144小结15参考文献17附录20摘要：三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）是我国海产经济蟹类，但是病害发生频繁。养殖水体中菌群结构及其演替规律对于探明梭子蟹发病原因及制定病害防治措施具有重要意义。本文采用构建16SrDNA克隆文库的方法调查三疣梭子蟹养殖塘水体中七月份和八月份细菌的群落结构。通过两个16SrDNA克隆文库的构建，共获得了131条有效序列。结果发现，两个文库中细菌的多样性丰富，共可归属为五个门：变

3、形菌门（Proteobacteria）、蓝细菌门（Cyanobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、CFB类群（Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides）以及厚壁菌门（Firmicutes）。其中细菌优势类群为蓝细菌门、α-变形菌纲和γ-变形菌纲，同时获得了蓝细菌门等通过细菌普通培养法无法获得的类群，故通过克隆文库可以更加全面的反映养殖塘水体细菌群落结构。不同养殖时间，蓝细菌门始终占优势，变形菌门、放线菌门和CFB类群细菌均有所增加，而厚壁菌门消失，两个克隆文库中细菌的群落组成及比例明显不同，即

4、实验期间梭子蟹养殖水体中细菌群落发生了演替现象。关键词：三疣梭子蟹；细菌群落演替；克隆文库Abstract:Portunustrituberculatusisakindofmarineeconomycrabsinchina,butdiseaseoccursfrequently.Asthecommunitystructureandsuccessionofmicroorganisminaquaculture16SrDNAclonelibraryconstructionwasusedtoinvestigatebacterialcommunitystruc

5、tureinthesamewaterofPortunustrituberculatusrearingpondinJulyandAugust.Bytheconstructionoftwo16SrDNAclonelibrary,131effectivesequenceshasbeenobtained.Thebacterialcommunitiesofthetwoclonelibrarieswerefoundtobediverse,includingmembersoffivephyli:Proteobacteria,Cyanobacteria,Actin

6、obacteria,Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides(CFB)group,andFirmicutes.BacteriaassignedtoCyanobacteria,α-Proteobacteriaandγ-Proteobacteriaweredominated.Cyanobacteriawhichdidn’tobtainedwiththemethodofmicrobiologicalculture.SothroughCultivation-independentmethodcanmorefullyrefle

7、cttherearingpondwaterbacterialcommunitystructure.Thebacterialcompositionsoftwolibraryweredifferent.Inparticular,theproportionsofvariousgroupsshiftedsignificantlyacrossthesamplingdates.KeyWords：Portunustrituberculatus;bacterialcommunitysuccession;libraryconstruction161前言梭子蟹养殖塘一

8、般是一种人工生态系统，其中微生物对这种系统的平衡起着很重要的作用，特别是细菌，对梭子蟹的健康生长也有着非常重要的影响[1]