三疣梭子蟹养殖塘弧菌群落结构研究【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）三疣梭子蟹养殖塘弧菌群落结构研究目录前言11材料与方法11.1样品采集11.2培养基21.3仪器设备21.4弧菌的分离、纯化21.5弧菌基因组DNA的提取及16SrDNA基因的PCR扩增21.6弧菌16SrDNA序列的测定及系统发育学分析22结果32.1弧菌数量比较32.2弧菌群落结构多样性32.2.1弧菌菌落类型多样性比较32.2.2弧菌种属分布多样性比较43讨论63.1养殖水体弧菌群落结构与病害的关系63.2菌落类型与种属分布的联系73.3弧菌的培养特性及其对实验的影响84展望8致谢8参考文献9摘要：采用平板计数、菌落形态观察和1

2、6SrDNA序列比对的方法，对健康和发病的三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）养殖水体的弧菌(Vibrio)数量和群落结构进行了比较研究。共分离得到42株弧菌，可分为5个菌落类型（C1-C5），6个种。健康塘养殖水体的弧菌数量为1.85-2.35×102cfu/mL，菌落主要分布在C1、C2和C4这3个类型，分布比较均匀，V.alginolyticus有6株，为第一优势种，种属分布也比较均匀；病害塘养殖水体的弧菌数量为0.65-1.9×102cfu/ml，菌落类型主要集中在C1类型，优势种为V.alginolyticus，与健康塘相比，

3、病害塘养殖水体中的弧菌菌落类型和种属分布均比较集中。这些结果似乎表明三疣梭子蟹发病与群落结构（比如弧菌的多样性、致病性弧菌的绝度优势地位）有直接关系，但与弧菌数量的关系无法从该实验得到。关键词：三疣梭子蟹；养殖水体；弧菌；群落结构；16SrDNAAbstract:Wecomparethenumberandthecommunitystructureofthevibriointhehealthyanddiseasedrearingwaterbyplatecount,colonycategoryand16SrDNAsequencealignmentmethods.T

4、hereare42vibriostrainsisolatedfromtherearingwater.Theycanbedividedintofivegroups(C1-C5)bycolonycategory,and6speciesbysequencing.Intheheathypond,thenumberoftheisolatedvibriois1.85-2.35×102cfu/mL,mainlycontributedintheC1,C2andC4groups,V.alginolyticusisthefirstdominantspecieswith6strai

5、ns,speciesisevenlydistributed.Whileinthediseasedpond,thenumberoftheisolatedvibriois0.65-1.9×102cfu/ml,mainlycontributedintheC1group,thedominantspeciesisV.alginolyticusonly.Thespeciesdistributionismoreconcentratedinthediseasedpondthaninthehealthypond.Theseresultsseemtoindicatethatthe

6、rearesomerelationswiththecommunitystructure（suchasthevibriodiversityandthedominantbacteria）andthedisease,butwecannotknowtherelationwiththevibrioquantityandthediseasefromthisstudy.Keywords:Portunustrituberculatus;rearingwater;vibrio;communitystructure;16SrDNAsequence前言三疣梭子蟹是我国重要的海产经济

7、蟹类，具有较高的经济价值。近年来，由于养殖规模的不断扩大、养殖密度的不断提高、养殖环境的污染，导致三疣梭子蟹的抗病力下降，容易感染病原体，使得疾病频繁发生，例如近几年由弧菌引起的“乳化病”给三疣梭子蟹养殖业带来了重大经济损失[1]。国外早在20世纪初就有学者[2]对海水鱼类弧菌病进行研究，自20世纪60年代后相继对多种弧菌属的致病菌有较丰富的研究和报道[3-6]。在三疣梭子蟹大规模养殖的过程中，由弧菌引起的死亡时有报道[7-8],是该行业发展的重要限制性因素。因此研究环境中弧菌群落结构及数目规律，对水产养殖、食品生产等与人类生活及健康密切相关的领域具有重要指导

8、意义。弧菌属于弧菌科(Vibriona