三疣梭子蟹溶藻弧菌疾病模型的构建

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1、第23卷第4期宁波大学学报（理工版）Vol.23No.42010年10月JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE)Oct.2010文章编号:1001-5132（2010）04-0035-06三疣梭子蟹溶藻弧菌疾病模型的构建1,21,2*1,21,21,2张樱,赵青松,秦方锦,沈理,金珊（1.宁波大学生命科学与生物工程学院,浙江宁波315211;2.宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江宁波315211）7-1摘要:采用溶藻弧菌(10CFU·mL)对三疣梭子蟹(Portunustrituberculatu

2、s)进行人工感染试验,于感染后0、24、48和72h分别观察蟹体的行动、体表及内部器官组织的病理变化,测定血细胞密度(THCs)及血淋巴、肌肉、肝胰腺3种主要组织中的碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)水平.结果表明:三疣梭子蟹感染溶藻弧菌24h后其行动、体表及内部器官组织等病理症状逐渐明显,肝胰腺、血淋巴、肌肉等3种主要组织中的AKP、ACP、POD活性和T-AOC水平及THCs变化显著,可作为疾病模型构建的指标.由于药物防治主要针对早期发病群体,因此,疾病模型构建的时

3、间选择病原菌感染后24h.采用上述方法构建的三疣梭子蟹溶藻弧菌疾病模型在相同条件下可重复性较强,并便于观测感染前后蟹体的变化情况.关键词:三疣梭子蟹;溶藻弧菌;疾病模型中图分类号:S945文献标识码:A溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)广泛分布于自健康动物的药动学数据并参考患病动物的病情拟然海区,是海水养殖中常见的条件致病菌.近定,它假设健康和患病动物体内的药量和药效变年来,随着人工养殖规模和集约化程度的提高,化是相同的,未考虑疾病因素对药物量效关系及[8-9]养殖环境严重恶化,引发了真鲷(Pagrosomusma

4、jor)、其在靶器官的动力学特征和药动学参数的影响.鲑点石斑鱼(Epinephelusfario)、花鲈(Lateolabrax但事实上,疾病可使机体组织或器官的血流量和japonicus)、大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)、中国通透性、药物蛋白结合率及代谢能力等生理机能发明对虾(Fenneropenaeuschinensis)、三疣梭子蟹生变化,从而影响药物在动物体内的吸收、分布、(Portunustrituberculatus)等多种海水养殖品种的代谢和排泄等过程.因此,笔者以三疣梭子蟹作为大规模弧菌感染性疾病

5、的爆发,给我国养殖业造研究对象,通过人工感染溶藻弧菌的方法,观测[1-7]成了巨大的经济损失.三疣梭子蟹溶藻弧菌病的发病症状及相关指标的目前,水产动物细菌性疾病的防治仍以药物变化,构建三疣梭子蟹弧菌性疾病模型,以期为进防治为主,渔业生产给药方案的制定主要是依据一步探讨疾病因素对水产动物的药物代谢动力学收稿日期:2010-04-06.宁波大学学报（理工版）网址:http://3xb.nbu.edu.cn基金项目:浙江省自然科学基金(Y307391)；教育部创新团队项目（IRT0734）.第一作者:张樱（1985－），女，浙江宁波人，

6、在读硕士研究生，主要研究方向:水产养殖及病害防控.E-mail:sakura6543@163.com*通讯作者:赵青松（1963－），男，浙江温岭人，硕士/高级实验师，主要研究方向:水产养殖及病害防控.E-mail:zhaoqingsong@nbu.edu.cn36宁波大学学报（理工版）2010的影响.再抽取1mL血淋巴液与抗凝剂1:1均匀混合,4℃-1离心分离(3000r·min,10min),收集上层血浆.随1材料与方法即将各蟹体解剖,剔除混于肝胰腺中的肠道和性腺后,迅速取出肝胰腺及与步足相连的腹壁肌肉1.1试验动物分别装于样

7、品袋中,并将各样品编号,–20℃保存.三疣梭子蟹购于宁波庄市梭子蟹暂养场,体将冷冻保存的各样品4℃解冻,血浆直接用于重(75±15)g,于60cm×50cm×40cm塑料水箱中暂酶活性测定.肌肉和肝胰腺组织分别准确称取养,选体表无损伤、体色正常的健康个体经检查确0.1g,置于无菌离心管中,按重量体积比加9倍无-1认无病后进行试验.试验用水采用海水晶配置,水菌生理盐水低温高速匀浆1min(10000r·min)制-1温(21±2)℃,盐度25±1,pH8.0±0.5.试验期间不成10%的组织匀浆,4℃离心分离(3000r·min,1

8、0投饵,连续充气,及时吸去排泄物,每天换水50%.min),取上清液进行测定.1.2供试菌株1.6血细胞计数(THCs)[10]溶藻弧菌由宁波大学生命科学与生物工程学采用蔡雪峰等方法用血球计数板在显微镜院水产病害室提供.感染前进行菌种活化并接种下进