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1、本科毕业设计（20__届）鲈鱼PPARγ启动子的克隆目录引言11实验材料和仪器11.1实验材料11.2主要试剂和和试剂盒11.3主要仪器12实验方法22.1基因组DNA提取22.2PPARγ启动子区域的获取22.2.1特异性引物的设计22.3PPARγ启动子的克隆22.3.11stPCR反应22.3.22ndPCR反应32.3.33rdPCR反应32.4.电泳检测与克隆使用引物42.5PCR产物的切胶纯化42.5.1重组质粒的构建和检测42.5.2感受态细胞的制备52.6重组质粒的转化52.7重组质粒的鉴定52.7.1重组质粒的抽提52.7.2重组质粒的PCR检测
2、及测序63实验结果与分析63.1鲈鱼PPARγ启动子基因序列分析63.2鲈鱼PPARγ启动子基因功能位点与结构的分析74讨论8致谢10摘要：PPAR（peroxisomeproliferator-activatedreceptor），即过氧化物酶体增殖剂激活受体，是一类由配体激活的核转录因子，是核受体家族的一员。目前在哺乳动物中发现PPAR存在三种亚型，即PPARα、PPARβ(也称PPARδ)和PPARγ。它们是配体调节的转录因子，在脂类代谢过程中起非常重要的作用。PPAR的三种亚型参与脂肪细胞分化作用的时相及程度各有不同，通过转染具有分化成脂肪细胞潜能的多种细
3、胞系进行评价，PPARγ的成脂作用最强。PPARγ具有脂肪组织特异性,能被脂肪酸及外源性过氧化物酶体增殖剂激活,而调控某些参与脂质代谢的酶的表达。为研究PPARγ在脂肪组织研究中的表达调节，我们克隆了PPARγ起始密码子上游1411bp序列，并使用生物信息学对此序列展开分析，查找其潜在的转录因子识别位点，其中有C/EBPb、CdxA、SRY、AML-1a、Sox-5、S8、Pbx-1、GATA等22个潜在的转录结合因子。关键词：鲈鱼；PPAR启动子；克隆Abstract:PPAR(peroxisomeproliferator-activatedreceptor),
4、theperoxisomeproliferator-activatedreceptor.itisaclassofligandactivatednucleartranscriptionfactorandamemberofthenuclearreceptorfamily.therearethreesubtypesofPPAR,namelyPPARα,PPARβ(alsoknownasPPARδ)andPPARγ.Theyareligandregulatedtranscriptionfactors.PPARplayaveryimportantroleinlipidmet
5、abolism.PPARthreesubtypesofcellsinvolvedintheroleoffatphaseandtovaryingdegrees,bytransfectionwiththepotentialtodifferentiateintofatcellsevaluateavarietyofcelllines,PPARγadipogenicroleofthestrongest.PPARγwithadiposetissue-specific,whichcanbeexogenousfattyacidsandperoxisomeproliferator-
6、activated,andregulationofcertainenzymesinvolvedintheexpressionoflipidmetabolism.PPARγinadiposetissueforthestudyoftheexpressionandregulation,weclonedthePPARγ1411bpsequenceupstreamofthestartcodon,andthissequenceusingbioinformaticstoanalyze,tofindpotentialtranscriptionfactorrecognitionsi
7、tes,ofwhichC/EBPb,CdxA,SRY,AML-1a,Sox-5,S8,Pbx-1,GATAandother22potentialtranscriptionbindingfactor.Keywords：Bass;PPARPromoter;Cloning引言核受体超家族是转录因子中最大的一个家族。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisomeproliferators—activatedreceptor，PPAR)是一类由配体激活的核转录因子，属于核内受体超家族成员。1990年，在啮齿类动物的肝脏中克隆出过氧化物酶体增值物激活受体PPARａ后,紧接着
8、又克隆出了
