鲈鱼CD4基因的cDNA克隆【优秀毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）鲈鱼CD4基因的cDNA克隆目录1引言12材料与方法22.1实验材料和仪器22.1.1实验材料22.1.2实验中所用试剂盒22.1.3其他主要试剂22.1.4主要仪器22.2实验方法32.2.1RNA的提取32.2.2鲈鱼肝脏常规cDNA的合成32.2.3鲈鱼CD4基因核心片段的克隆42.2.4PCR产物切胶回收纯化52.2.5PCR纯化产物与pMD-18T载体的连接62.2.6感受态细胞的制备62.2.7重组质粒的转化72.2.8重组质粒的挑克隆PCR检测及测序73结果和分析83.1鲈鱼肝

2、脏组织总RNA的琼脂糖凝胶电泳结果83.2鲈鱼CD4基因核心片段的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果83.3CD4基因PCR产物与pMD-18T载体连接后的重组载体琼脂糖凝胶泳结果93.4鲈鱼CD4基因核心片段的测序结果93.5鲈鱼CD4基因核心片段cDNA序列编码的氨基酸序列…………………………………………….134讨论15致谢15参考文献............................................................................................

3、.......................................................................16摘要：CD4是一种跨膜糖蛋白，是细胞介导的免疫反应的基础。它作为T细胞的协同受体，提高CD4+T细胞和抗原呈递细胞间的亲和力，介导特异性抗原呈递，引发一系列的免疫应答。本文报道了关于鲈鱼（Lateolabraxjaponicus）CD4基因核心片段的cDNA克隆、同源性分析、多重比对分析及系统进化树分析。分析结果显示鲈鱼CD4基因核心片段保守度高，与舌齿鲈（Dicentra

4、rchuslabrax）等十四个物种进行了氨基酸序列的同源性分析（24%-68%），与鲈形目舌齿鲈（Dicentrarchuslabrax）等同源性最高为68%，与哺乳动物同源性较低。CD4分子因其在免疫系统中的重要作用，目前已大量研究了人的CD4分子，鱼类中研究较少，我们的研究结果将会增加关于鲈鱼T细胞免疫应答的新的了解，对鉴别硬骨鱼类的T细胞亚群有一定的帮助。关键词：CD4；鲈鱼；T细胞Abstract：CD4,atransmembraneglycoprotein,isthefoundationofthecell

5、-mediatedimmuneresponse.Astheco-receptorofTcells,CD4enhancestheaffinitybetweenCD4+Tandtheantigen-presentingcells,andmediatesspecificantigentopresent,triggeringaseriesofimmuneresponse.WeclonedtheCD4genecorefragmentsoftheseabass（Lateolabraxjaponicus）cDNAandanalyz

6、editshomology,multiplealignmentandphylogenetictree.ThesequenceanalysisindicatedthatthededucedaminoacidsequenceoftheLateolabraxjaponicuscDNAsharedhighidentitywithotherfourteenspecies,suchasDicentrarchuslabrax,whichisfrom24%to68%,andthehighestis68%withDicentrarch

7、uslabrax.SinceCD4isofgreatimportanceintheimmunesystem,alargenumberofresearcheshavebeenmadetounderstandCD4ofhumanbeings,whereaslittleonfishes.ThestudywilldeepenourunderstandingofTcellimmuneresponseontheseabass,whichcouldhelptoidentifytheT-cellsubsetsofTeleostfis

8、h.Keywords：CD4 ;Lateolabraxjaponicus;Tcells1引言鱼类虽是低等脊椎动物，但具备免疫的基本特性。与哺乳动物相同，其体内也存在特异性免疫应答和非特异性免疫应答。参与鱼类特异性免疫应答的细胞主要是淋巴细胞。对于鱼类淋巴细胞的异质性，早在70年代就提出来了，目前利用半抗原-载体效应和单克隆抗体等技术已经证实鱼类