pygo2mirna在人脑胶质瘤的表达及作用机制研究

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1、缩略语表1中文摘要2英文摘要3Blf口5第一部分Pygo2-miRNAs的预测、筛选71.材料71.1实验材料71.2主要仪器71.3主要试剂71.4常用溶液及培养基配制82.实验方法83.结果10第二部分Pygo2-miRNAs确切作用靶点的确定1.材料131.1实验材料131.2主要仪器131.3常用溶液的配制132.实验方法153.结果22第三部分miRNA-214对脑胶质瘤细胞增殖，侵袭的影响材料1.1实验材料1.2主要仪器实验方法结果1.2.3.讨论结•论27272727303236参考文献36综述39缩略语表siRNAsmallinterferingRNA小干扰RN

2、AmiRNAmicroRNA微小RNAB-catcninbeta-actinB-肌动蛋口3UTR♦3untranslatedregion3"端非翻译区Bpbasepair碱基对BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白cDNAcomplementaryDNA互补DNAEDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚枫ECMextraccllularmatrix细胞外基质FBSfetalbovineserum胎牛血清HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶PCRpo

3、lymerasechainreaction聚合酶链反应RT-qPCRRealtimeqPCR实时荧光定量PCRkDkilo-dalton千道尔顿MTT3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3-(4,5-二甲基II塞哩-2)-3,5-di-phcnytetrazoliumromidc3,5-二苯基四氮卩坐澳盐NCnegativccontrol阴性对照PBSphosphate-buffereclsaline磷酸盐缓冲液Pygo2-miRNA在人脑胶质瘤的表达及作用机制研究摘要Pygo2蛋白作为Wnt信号通路下游新功能蛋白，其表达紊乱与人脑胶质瘤恶性程度密

4、切相关，调控机制非常复杂，很多机制尚不清楚。本实验旨在探讨人脑胶质瘤中异常表达的miRXA对Pygo2蛋白的可能调控作用。目的：研究miRNA靶向Pygo2在人脑胶质瘤的表达及作用机制方法：利用生物信息学预测软件(targetscan,miRanda,PicTar等)预测Pygo2的miRNAs,进而通过人脑胶质瘤miRNA表达谱芯片检测系统筛选候选的靶向Pygo2-3,UTR的miRNAs。针对差异表达最大的miRNA,首先构建成含有突变位点Pygo2-3,UTR的荧光素酶报告载体，然后利用Pygo2-miRNA过表达质粒下调Pygo2,从而抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。结果：

5、生物信息学预测软件预测出37个与Pygo2相关的miRNAs,结合人脑胶质瘤miRNA表达谱芯片低表达结果，发现Pygo2可能受包括miR-31>miR-34c-5p、miR-195、miR-214在内13个miRNAs调控。荧光素酶报告基因活性、real-timePCR验证及westernblot实验提示,与其余miRNAs相比,miR-214最有可能在人脑胶质瘤细胞中调控Pygo2的表达。在体外上调miR-214的表达引起胶质瘤细胞增殖、侵袭力降低。结论：首次发现人脑胶质瘤中Pygo2的过表达可能与miR-214相关,miR-214能够通过下调Pygo2基因的表达抑制脑胶质

6、瘤细胞的增殖和侵袭，提示miR-214可能作为重要的抑癌因子参与抑制脑胶质瘤增殖、迁移和入侵。这些在本文验证过的miRXA可能作为生物标记为临床诊断及预后判断提供帮助。关键词：Pygo2,miR-214,脑胶质瘤，增殖，侵袭semUOHSS①Mdx①I】①>0ZOMAd一eq-punoj①m•①mouli①qFInd・gzomAd①q)SPQMIepAIR。①ujp寸IZIHIW户eq)PQTe①AQaSJORO①a①S2①JIonTH-n.gZOMAd40spuepruuuo-4①IQPbJCUIAIOAUISA03sse①SSQJIOn」・aobJCAd40-刃①qppob

7、joaeppqboIlu4->eq户SVNHIE04->eplpueoposq-UOPIOM・SAeJJeoJO”UIVNH”三pu^(JeJLoIdpueepueHE4ueos40bJOJte4)qoeojtaaeoomsu”ue3.SSP1-spoq-ow•elu.218ueEnqUHzomAdSUHFOmJe户AqVNHHWcoSOIPnpssSHUeqoolupueOIOJoqpApenFSOJL-Foorqo&03Ad04aulpusAqu.2SSOJdxoouoaJoSJtope