MAP2在人脑胶质瘤中的表达及意义

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1、http://www.paper.edu.cn1MAP2在人脑胶质瘤中的表达及意义谢有科，钟雪云，贾晋萍，方茅，谢彬彬，李素梅暨南大学医学院病理教研室，广州（510632）E-mail：xyk-james@qq.com摘要：目的：研究MAP2在人脑胶质瘤细胞中的表达情况及其临床意义。方法：免疫组化方法检测56例胶质瘤标本中MAP2的表达水平及其与胶质瘤病理分级的关系；免疫荧光检测人脑胶质瘤细胞株SWO-38在分化诱导剂CDA-2作用前后MAP2表达水平变化；Westernblotting检测MAP-2蛋白在CDA-2处理SWO-38细胞0h、24h、

2、48h和72h表达水平。结果：1.MAP2在各级人脑胶质瘤标本中均有不同程度表达，MAP2的表达随着胶质瘤分级增加而降低，肿瘤分级与MAP2表达呈负相关性（F=-0.647，P=0.000）；2.CDA-2作用SWO-38细胞72h后,用药组MAP2表达较对照组明显增强，细胞突起部位较为明显；3.CDA-2作用SWO-38细胞后MAP2蛋白表达水平随时间（0h、24h、48h和72h）延长而持续升高。结论：在人脑胶质瘤细胞中MAP2的表达随肿瘤分级或恶性程度降低而增加，可作为胶质瘤临床分级和预测预后的重要指标。关键词：MAP2；胶质瘤；CDA-2；分

3、级；免疫组织化学中图分类号：R739.411．引言微管相关蛋白2(microtubulin-associatedprotein2,MAP2)是一种热稳定的磷蛋白,与MAP4[1]和tau蛋白同属于结构性微管相关蛋白家族,主要在中枢神经系统神经元胞体和树突表达。人脑MAP2蛋白存在多种剪切变异体，可分为两大类：一类是高分子MAP2(HMW-MAP2)，包括MAP2a和MAP2b,分子量分别为280和270kDa；另一类为低分子MAP2(LMW-MAP2)，包括MAP2c、MAP2d和MAP2e，分子量分别为70～75kDa。多数人认为MAP2a/2b在

4、神经元发育成熟和稳定中[2-3]起重要作用，而MAP2c则可能参与树突的延伸和可塑性。目前多数研究集中于MAP2对神经[4-5]元结构和功能方面的研究，而MAP2在胶质瘤中的表达情况、功能及调控等研究较少。CDA-2是从健康人尿中分离提纯的一组天然活性成分组成的非细胞毒性抗肿瘤生物制剂，实验证明对[6]多种肿瘤有明显抑制生长和诱导分化的作用。本研究观察MAP2在不同级别人脑胶质瘤标本中的表达及胶质瘤细胞株在SWO-38在CDA-2作用前后MAP2表达水平变化，以探讨MAP2在胶质瘤细胞中的变化情况及临床意义。2.材料与方法2.1材料与试剂材料：56例

5、人脑胶质瘤及5例正常人胚胎脑组织标本来源于广东省广州市华侨医院病理科和广州医学院第二附属医院病理科2003-2007年存档的石蜡包埋组织.脑胶质瘤按2003年WHO脑肿瘤分类及分级标准，经病理组织学检查确诊，其中Ⅰ级1例，为毛细胞性星形细胞瘤；Ⅱ级24例，包括星形细胞瘤I-II级13例，少突星形细胞瘤6例，室管膜瘤5例；Ⅲ级18例，包括间变型星形细胞瘤15例，间变型室管膜瘤3例；Ⅳ级13例，星形细胞瘤IV级6例，胶质母细胞瘤7例。标1本课题得到国家自然科学基金（No.30670795）;广东省自然科学基金（No.06025208）;高等学校博士点专项

6、科研基金（No.20040559008）的资助。-1-http://www.paper.edu.cn本均连续切片，厚4µm，贴于涂有多聚赖氨酸防脱片胶的载玻片，烤片后备用。人脑胶质瘤细胞株SWO-38由本教研室自备。试剂：兔抗人MAP2a/2d（#4542）单克隆抗体购于美国cellsignaling公司；小鼠抗人GAPDH单克隆抗体为美国Chemicon公司产品；Cy3标记二抗为美国sigma公司产品；S-P超敏试剂盒均为迈新公司产品；CDA-2溶液由安微合肥永生制药公司生产并惠赠，规格：40mg/mL；RPMI1640为Gibco公司产品；新生牛

7、血清为杭州四季青生物制品公司产品;BCAProteinAssayKit为美国PIERCE公司产品;羊抗兔HRP-IgG及羊抗小鼠HRP-IgG购于北京鼎国生物技术公司。2.2方法2.2.1人脑胶质瘤组织标本的MAP2蛋白检测采用免疫组织化学方法，其具体操作步骤按试剂盒说明书进行。2.2.2胶质瘤细胞株SWO-38培养、药物处理及免疫荧光标记参照文献[7]的方法，将一定数量的SWO-38细胞接种到预先放置无菌盖玻片的6孔板常规培养24h后，对照组继续培养，用药组加入CDA-2液，终浓度为3mg/mL，处理72h后取出，PBS洗3次，95%酒精固定，MA

8、P2抗体1：1000孵育2h，PBS洗3次，3min/次，加入荧光抗体Cy3，孵育1h,PBS洗3次，3mi