HMGN5在人脑胶质瘤中的表达、功能及分子机制初步研究

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1、分类号：R739.41学校代码：10062密级：学号：2013601058博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：HMGN5在人脑胶质瘤中的表达、功能及分子机制初步研究TITLE：ExpressionofHMGN5andpreliminarystudyonitsfunctionmolecularmechanisminglioma一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：马全锋导师：王金环天津医科大学研究生院二0一七年五月分类号：R739.41学校代码：10062密级：学号：2013601058学位类别：科学学位专业学位□√学科门类

2、：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：HMGN5在人脑胶质瘤中的表达、功能及分子机制初步研究TITLEExpressionofHMGN5andpreliminarystudyonitsfunctionmolecularmechanisminglioma一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：马全锋导师：王金环天津医科大学研究生院二0一七年五月天津医科大学博士学位论文中文摘要目的脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，约占中枢神经系统恶性肿瘤的50%，其中星形细胞瘤约占75%，其复发率和病死率极高。目前，胶质瘤的治疗遵循以

3、手术为主、辅助放化疗的综合治疗原则。由于肿瘤侵袭性强，与周围组织界限不清，目前临床疗效仍不理想，许多患者的生存期低于2年。随着分子生物学研究的不断深入，胶质瘤的个体化靶向治疗是有望取得突破性进展的方向。HMGN5蛋白是高迁移率族核小体结合蛋白（HMGN）家族的一员，通过与核小体相结合引起染色体结构的改变，影响着细胞生物功能和分子转录。最近，一些研究证实，HMGN5在许多人类肿瘤（前列腺癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、骨肉瘤）的发生发展中发挥重要作用。但是，HMGN5在人脑胶质瘤中的表达情况、具体功能及机制尚不明确。探讨胶质瘤组织中HMGN5的表达与临床病理分级的相关性及

4、其在胶质瘤中的具体功能，旨在为胶质瘤的基因靶向治疗提供理论依据。方法1.HMGN5在人脑胶质瘤中的表达及其与临床病理特征的相关性分析利用RT-PCR检测HMGN5在胶质瘤组织和正常脑组织中的mRNA表达水平；Westernblot和免疫组织化学染色检测HMGN5蛋白在胶质瘤组织及正常脑组织中的表达；制作胶质瘤组织芯片，应用免疫组织化学染色检测HMGN5蛋白的表达，分析其表达情况与病理分级之间的关系。2.HMGN5对胶质瘤细胞生物学功能的影响在胶质瘤细胞系U251和U87中应用siRNA瞬时干扰HMGN5蛋白的表达，应用RT-PCR和Westernblot检验干扰效

5、率。沉默HMGN5表达后：CCK-8实验检测U251和U87细胞增殖的变化；应用PI单染检测转染后细胞周期的变化；双染法应用流式细胞仪检测细胞凋亡；JC-1染色检查线粒体膜电位变化；细胞划痕和Transwell实验检测U251和U87细胞运动活性的改变（侵袭和迁移能力）。3.HMGN5对胶质瘤细胞生物学作用的体内和机制研究构建裸鼠皮下荷瘤模型，检测沉默HMGN5表达后胶质瘤细胞体内成瘤及增殖能力的改变；通过WersternBlot检测沉默HMGN5后对生物学特性相关蛋白（BCL2，CyclinD1，MMP-2，MMP-9Bax，p21）及信号通路分子p-PI3K，

6、p-AKT，p-MEK1和p-ERK1/2的影响。I天津医科大学博士学位论文结果1.RT-PCR和WesternBlot显示，相对于非肿瘤脑组织HMGN5在mRNA和蛋白水平SNB19、U87、A172、LN229、U251和LN308胶质瘤细胞系中均有稳定表达，且表达量明显呈现高表达状态，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示，HMGN5在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异显著，具有统计学意义（X2值12.326，P值0.00045）。HMGN5表达与胶质瘤病理分级关系：34例低级别（Ⅰ+Ⅱ）胶质瘤中占47.06%；86例高级别（Ⅲ+Ⅳ）胶质瘤中72

7、例高表达，占83.72%。HMGN5在高、低级别胶质瘤中的表达差异显著，具有统计学意义（X2值16.748，P值0.0004）。2.Real-timePCR检测结果表明转染HMGN5siRNA后U251和U87细胞中HMGN5mRNA明显下降，差异有统计学意义；转染HMGN5siRNA后采用CCK8检测U251和U87细胞增殖活性的变化，检测结果显示转染48h和72h后，与对照组相比HMGN5siRNA转染组细胞的吸光度值（OD490）明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；应用PI单染检测转染后细胞周期的变化，沉默HMGN5的表达后，出现明显的G0/G1期阻

8、滞，差异具