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《香鱼热休克蛋白HSP70基因的克隆及生物信息学分析【开题报告+文献综述+毕业设计】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本科毕业论文系列开题报告生物技术香鱼热休克蛋白HSP70基因ORF的克隆及生物信息学分析一、选题的背景与意义热休克蛋白（heatshockprotein,HSPs），又称应激蛋白（stressprotein,SP），是一组在结构上高度保守的多肽，广泛存在于自然界原核、真核细胞中，正常情况下与应激条件下都发挥重要的生理功能。按HSPs分子量大小可将其分为以下几个家族：HSP100家族（100~110KDa）、HSP90家族（分子量约83~90KDa）、HSP70家族（分子量约66~78KDa）、HSP60家族、小
2、分子量smHSP(分子量约15~30KDa)及泛素家族（7~8KDa）等，其中其中HSP70家族是HSPs中最保守和最重要的一族，在大多数生物中含量最多，细胞受到应激后生成也最显著。HSP70具有分子伴侣作用、抗氧化作用、参与免疫作用和抗细胞凋亡作用等多种生物学功能，并且在免疫调节中也发挥着重要作用。香鱼（Plecoglossusaltivelis）属鲑亚目、香鱼科、香鱼属，是我国重要的小型名贵经济鱼类，其肉质细嫩多油、营养丰富、清香无腥、色香味俱佳，素有“淡水鱼之王”之美称，曾被列入“雁荡五珍”，在我国大陆港
3、台地区及日本东南亚更被称为“河鱼之王”，香鱼现已被国家列为二级保护动物。香鱼干品粗蛋白中含人体必需氨基酸68.85%，并有药膳价值。由于野生香鱼资源有限，故市场价格日益攀升，国内鲜活香鱼收购价达150-300元/公斤，日本市场售价为1000-3000日元/公斤，加工成“色如黄金、可携千里”的香鱼干，每千克可达l000元以上。日本香鱼养殖年产量为8600吨，每年市场需求大约为3万-5万吨。我国发展香鱼养殖业自然条件比日本优越，浙江省沿海河流都适宜于香鱼的引种放流、放流增殖和沿河流水精养，因此，香鱼是一个具有重要经
4、济价值的水产养殖品种。随着养殖面积逐年扩大，高密度的人工养殖导致病害频发，这些病害已成为制约香鱼养殖产业发展的瓶颈。近年来有研究将HSP70作为指示鱼类健康的生物指标。本研究以香鱼为材料，克隆HSP70基因的ORF并对其进行生物信息学分析，为进一步研究鱼类HSP70的结构、功能和作用机制打下基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：1.香鱼总RNA的提取本实验使用BIOZOL总RNA提取试剂盒（BioFlux，日本）提取紫色土豆总RNA。2.逆转录合成cDNA使用AMV反转录酶（TaKaRa，日本）进行cDN
5、A第一链的合成，将反应混和液在室温下放至10min后，42℃反转录1h。3.PCR扩增HSP70基因ORF以香鱼反转录cDNA为模板进行PCR扩增，扩增产物使用1%琼脂糖凝胶电泳检测结果。4.PCR扩增产物的鉴定将含有目的片段的琼脂糖凝胶切下，使用小量胶回收试剂盒（Elutefast，中国）进行回收，之后使用pMD18-TVector（TaKaRa，日本）进行连接反应。使用自制的大肠杆菌DH5α感受态细胞进行转化。最后，在无菌条件下，对重组子进行筛选与鉴定。5.测序6.香鱼HSP70基因的生物信息学分析翻译、序
6、列比对、蛋白质一级结构分析、二级结构分析、三级结构分析、进化树分析三级结构分析二级结构分析进化树分析蛋白质一级结构分析序列比对翻译生物信息学分析测序PCR扩增产物的鉴定PCR扩增逆转录合成cDNARNA提取香鱼三、研究的方法与技术路线：四、研究的总体安排与进度：1.第一阶段（10月－12月）：完成开题报告，查阅相关文献从而确定实验方法，制定实验步骤。2.第二阶段（2月－3月）：HSP70基因ORF的克隆及测序。3.第三阶段（3月－4月）：生物信息学分析。4.第四阶段(5月)：完成毕业论文并答辩。五、主要参考文献
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